Целевые ковалентные ингибиторы (TCI) или целевые ковалентные препараты — это рационально разработанные ингибиторы , которые связываются и затем связываются с целевыми белками . Эти ингибиторы обладают функциональной группой , образующей связь, с низкой химической реактивностью , которая после связывания с целевым белком позиционируется для быстрой реакции с ближайшим нуклеофильным остатком в целевом сайте с образованием связи. [1]
За последние 100 лет ковалентные препараты оказали большое влияние на здоровье человека и стали весьма успешными препаратами для фармацевтической промышленности . [2] Эти ингибиторы реагируют со своими целевыми белками, образуя ковалентный комплекс, в котором белок утрачивает свою функцию. Большинство этих успешных препаратов, включая пенициллин , омепразол , клопидогрель и аспирин , были обнаружены благодаря счастливой случайности в фенотипических скринингах . [3]
Однако ключевые изменения в подходах к скринингу, наряду с проблемами безопасности, заставили фармацевтов неохотно заниматься ковалентными ингибиторами систематическим образом (Liebler & Guengerich, 2005). [4] [5] В последнее время значительное внимание уделяется использованию рационального дизайна лекарств для создания высокоселективных ковалентных ингибиторов, называемых целевыми ковалентными ингибиторами. [6] Первый опубликованный пример целевого ковалентного препарата был для киназы EGFR. [7] [8] Но теперь это расширилось и на другие киназы [9] [6] и другие семейства белков. [10] [11] Помимо малых молекул, ковалентные зонды также получают из пептидов или белков. Путем включения реактивной группы в связывающий пептид или белок посредством посттрансляционной химической модификации [12] или в качестве неприродной аминокислоты [13] целевой белок может быть специфически конъюгирован посредством реакции, вызванной близостью.
Ковалентная связь может привести к потенциям и эффективности лиганда , которые либо исключительно высоки, либо, для необратимых ковалентных взаимодействий, даже по существу бесконечны. Таким образом, ковалентная связь позволяет регулярно достигать высокой потенции в соединениях с низкой молекулярной массой , наряду со всеми полезными фармацевтическими свойствами, которые связаны с малым размером. [14] [15]
Ковалентные ингибиторы могут быть разработаны для нацеливания на нуклеофил , который является уникальным или редким в семействе белков. [7] [6] [9] [16] Тем самым гарантируя, что образование ковалентной связи не может произойти с большинством других членов семейства. Этот подход может привести к высокой селективности против близкородственных белков, поскольку, хотя ингибитор может временно связываться с активными участками таких белков, он не будет ковалентно маркировать их, если у них отсутствует целевой нуклеофильный остаток в соответствующем положении.
Восстановление фармакологической активности после ковалентного необратимого ингибирования требует повторного синтеза целевого белка. Это имеет важные и потенциально выгодные последствия для фармакодинамики лекарственных средств , в которой уровень и частота дозирования связаны со степенью и продолжительностью результирующего фармакологического эффекта. [17]
Ковалентные ингибиторы могут использоваться для оценки вовлечения мишени, что иногда может использоваться доклинически и клинически для оценки связи между дозой препарата и эффективностью или токсичностью . [17] Этот подход использовался для ковалентных ингибиторов Btk доклинически и клинически, чтобы понять связь между введенной дозой и эффективностью в животных моделях артрита и занятостью мишени в клиническом исследовании здоровых добровольцев. [18]
Разработка ковалентных лекарственных средств требует тщательной оптимизации как нековалентной связывающей аффинности (которая отражается в K i ), так и реакционной способности электрофильной боеголовки (которая отражается в k 2 ).
Первоначальный дизайн TCI включает три ключевых шага. Во-первых, биоинформатический анализ используется для идентификации нуклеофильной аминокислоты (например, цистеина), которая находится либо внутри, либо вблизи функционально значимого сайта связывания на мишени препарата, но редко встречается в этом семействе белков. Затем идентифицируется обратимый ингибитор, для которого известен режим связывания. Наконец, вычислительные методы на основе структуры используются для руководства дизайном модифицированных лигандов, которые имеют электрофильную функциональность и расположены так, чтобы специфически реагировать с нуклеофильной аминокислотой в целевом белке. [1]
Разработаны целевые ковалентные фотоизомеризуемые лиганды (фотопереключатели) для дистанционного и обратимого управления активностью рецепторных белков с помощью света. Они использовались в качестве молекулярных протезов для восстановления зрительного входа в сетчатку [19] и слухового входа в улитку через глутаматные рецепторы. [20] Конъюгация лигандов направлена на определенные остатки лизина через механизм аффинной маркировки.
Современные программы по разработке лекарств неохотно рассматривают ковалентные ингибиторы из-за проблем с токсичностью. [5] Важным фактором стала токсичность нескольких известных препаратов, которая, как полагают, вызвана метаболической активацией обратимых препаратов. [5] Например, высокие дозы ацетаминофена могут привести к образованию реактивного метаболита N-ацетил-p-бензохинонимина. Кроме того, ковалентные ингибиторы, такие как бета-лактамные антибиотики, которые содержат слабые электрофилы, могут привести к идиосинкразической токсичности (IDT) у некоторых пациентов. Было отмечено, что многие одобренные ковалентные ингибиторы безопасно использовались в течение десятилетий без наблюдаемой идиосинкразической токсичности. Кроме того, IDT не ограничиваются белками с ковалентным механизмом действия. [21] Недавний анализ отметил, что риск идиосинкразической токсичности может быть снижен за счет более низких доз вводимого препарата. Дозы менее 10 мг в день редко приводят к IDT независимо от механизма действия препарата. [22]
Несмотря на явное отсутствие внимания к разработке ковалентных ингибиторов со стороны большинства фармацевтических компаний, существует несколько примеров ковалентных препаратов, которые были одобрены или переходят на поздную стадию клинической разработки.
AMG 510 от Amgen — это ковалентный ингибитор KRAS p.G12C, который недавно завершил фазу I клинических испытаний. [23] Препарат вызвал частичный ответ у половины подлежащих оценке пациентов с немелкоклеточным раком легких с мутацией KRAS G12C и привел к стабилизации заболевания у большинства подлежащих оценке пациентов с колоректальным раком (или раком аппендикса).
Ингибиторы EGFR второго поколения Афатиниб и Мобоцертиниб были одобрены для лечения рака легких, вызванного EGFR, а Дакомитиниб находится на поздней стадии клинических испытаний. Ингибиторы EGFR третьего поколения, которые нацелены на мутантный EGFR, специфичный для опухоли, но селективны против дикого типа EGFR, которые, как ожидается, приведут к более широкому терапевтическому индексу. [24]
Ингибитор пан-ErbB Нератиниб был одобрен в США в 2017 году и в ЕС в 2018 году для расширенной адъювантной терапии взрослых пациентов с раком молочной железы на ранней стадии с повышенной экспрессией/амплификацией HER2 после терапии на основе трастузумаба . [25] [26]
Ибрутиниб , ковалентный ингибитор тирозинкиназы Брутона , одобрен для лечения хронического лимфолейкоза , макроглобулинемии Вальденстрема и лимфомы из клеток мантийной зоны .
Paxlovid — ковалентный ингибитор фермента 3CLpro (Mpro). Он находится на III фазе испытаний для раннего лечения пациентов, инфицированных SARS-CoV-2 , у которых не развилась тяжелая форма заболевания COVID-19 и которым не требуется немедленная госпитализация.