Многоэлектродная агрегометрия
Метод медицинской диагностики
Многоэлектродная агрегометрия
Многопластинчатый анализатор
ЦельОпределение функции тромбоцитов
ТестЦельная кровь

Многопластинчатая многоэлектродная агрегометрия (МЭА) — это тест функции тромбоцитов в цельной крови . [1] [2] Тест может использоваться для диагностики нарушений тромбоцитов, [3] [4] [5] мониторинга антиагрегантной терапии, [6] а также исследуется как потенциальный предиктор потребности в переливании крови и риска кровотечения при кардиохирургических операциях. [7]

Инструмент

Анализатор Multiplate MEA (Roche Diagnostics International Ltd) имеет 5 каналов для одновременного измерения нескольких образцов или агонистов . Прибор обнаруживает изменение электрического импеданса , когда тромбоциты агрегируют на металлических электродах в тестовой кювете . Каждая кювета содержит две пары сенсорных электродов, каждый из которых измеряет изменение импеданса. Дублирующие датчики служат в качестве интегрированного контроля качества, и анализ принимается, если коэффициент корреляции измерений больше 0,98. Также рассчитывается отличие каждой кривой от средней кривой, и принимается отличие менее 20%. Тестовые кюветы также содержат магнитный перемешивающий стержень с тефлоновым покрытием . Увеличение импеданса по мере агрегации преобразуется в единицы агрегации (AU) и отображается в зависимости от времени на экране компьютера.

Образец

Производитель рекомендует использовать гирудин в качестве антикоагулянта для образцов, подлежащих тестированию, но исследования показали, что гепарин является хорошей альтернативой. [8] [9] Для каждого анализа требуется 300 мкл крови, которая разбавляется таким же количеством физиологического раствора . После пипетирования крови и физиологического раствора в кювету тест инкубируется в течение трех минут, прежде чем добавляется выбранный агонист. Затем тест начинается, и агрегация тромбоцитов регистрируется с интервалом примерно в 0,5 секунды в течение шести минут. Рассчитываются три параметра: агрегация , скорость и площадь под кривой (AUC). Агрегация (в AU) — это максимальная высота кривой агрегации , а скорость (в AU/мин) — это максимальный наклон кривой. AUC — самый важный параметр . Он регистрируется в единицах (U) и зависит как от высоты, так и от наклона кривой агрегации, и является лучшим общим показателем активности тромбоцитов.

Многопланшетные тесты/реагенты

Функция агрегации тромбоцитов по основным нарушениям и   агонистам
АДПАдреналинКоллагенРистоцетин
Ингибитор или дефект рецептора P2Y [10]УменьшилосьНормальныйНормальныйНормальный
Дефект адренергических рецепторов [10]НормальныйУменьшилосьНормальныйНормальный
Дефект рецептора коллагена [10]НормальныйНормальныйСнижено или отсутствуетНормальный
НормальныйНормальныйНормальныйСнижено или отсутствует
УменьшилосьУменьшилосьУменьшилосьНормальный или сниженный

ADPтест

Аденозиндифосфат (АДФ) является агонистом тромбоцитов. Когда его добавляют в цельную кровь, разведенную физиологическим раствором, в тестовой кювете, он стимулирует рецепторы АДФ на тромбоцитах, активируя тромбоциты. Активация тромбоцитов приводит к изменению формы и дегрануляции, а высвобождаемое содержимое гранул дополнительно активирует тромбоциты. Активация также вызывает конформационное изменение рецептора гликопротеина IIb/IIIa (GPIIb/IIIa), что придает ему высокое сродство к фибриногену . Связывание фибриногена с рецепторами GPIIb/IIIa приводит к образованию мостиков между тромбоцитами и вызывает агрегацию тромбоцитов. Антиагрегантные препараты, такие как клопидогрель и прасугрель, необратимо ингибируют рецептор АДФ P2Y12 , что приводит к снижению агрегации тромбоцитов, вызванной АДФ. Препараты, которые ингибируют рецептор GPIIb/IIIa, например, эптифибатид , также могут снижать или устранять реакцию тромбоцитов, вызванную АДФ. [11]

ASPIтест

В ASPItest арахидоновая кислота добавляется к образцу крови, разведенной физиологическим раствором. Арахидоновая кислота преобразуется в простагландин H2 (PGH2) циклооксигеназой-1 (COX1), а PGH2 затем преобразуется в тромбоксан A2 (TXA2) тромбоксансинтазой . TXA2 увеличивает агрегацию тромбоцитов, способствует дегрануляции и стимулирует активацию тромбоцитов. Ингибирование COX1, как в случае с ацетилсалициловой кислотой , и ингибирование или отсутствие рецептора GPIIb/IIIa, как это наблюдается при тромбастении Гланцмана , снизит агрегацию тромбоцитов в ответ на арахидоновую кислоту. [12]

COLtest

Коллаген добавляется к смеси образца и физиологического раствора и связывается с коллагеновыми рецепторами на тромбоцитах. Это приводит к высвобождению арахидоновой кислоты, которая преобразуется в мощный активатор тромбоцитов TXA2. COLtest чувствителен к ингибированию COX1 и GPIIb/IIIa и тромбастении Гланцмана . [13]

РИСТОтест

Ристоцетин образует комплексы с фактором фон Виллебранда (vWF), которые связываются с рецепторами гликопротеина Ib (GP1b) на тромбоцитах, вызывая активацию и агрегацию тромбоцитов. Сниженная или отсутствующая агрегация в ответ на ристоцетин может быть вызвана недостатком или снижением vWF, как это наблюдается при болезни фон Виллебранда (vWD), или отсутствием или снижением количества рецепторов GP1b, как при синдроме Бернара-Сулье (BSS). RISTOtest можно проводить в двух концентрациях: RISTOhigh и RISTOlow. При RISTOhigh применяется концентрация ристоцетина 0,77 мг/мл. Обычно это вызывает сильную агрегацию тромбоцитов, а низкая или отсутствующая агрегация может быть вызвана ранее упомянутыми состояниями vWD и BSS. [14] В RISTOlow концентрация ристоцетина составляет всего 0,2 мг/мл, и на уровне, который обычно не вызывает сильной реакции агрегации. Этот тест может определить, проявляет ли vWF более сильную, чем обычно, тенденцию к агрегации тромбоцитов, что можно наблюдать в подтипе vWD, называемом vWDIIb. [15]

TRAPтест

Активирующий пептид тромбинового рецептора-6 (TRAP-6) активирует тромбоциты через активируемый протеазой тромбинового рецептора рецептор-1 (PAR-1). Связывание TRAP-6 с PAR-1 вызывает конформационное изменение рецепторов GPIIb/IIIa на тромбоцитах, что придает им высокое сродство к фибриногену. Затем фибриноген связывается с рецепторами, сшивая несколько тромбоцитов и вызывая агрегацию. Агрегация в TRAPtest может быть снижена или отсутствовать при тромбастении Гланцмана , когда рецепторов GPIIb/IIIa мало или они отсутствуют, или если пациент принимает антагонисты GPIIb/IIIa . Traptest имеет лишь незначительную чувствительность к ингибированию рецепторов COX1 и АДФ. [16]

Реагент АСА

Добавление реагента ASA ( ацетилсалициловой кислоты ) к образцу крови снижает агрегационные реакции в ASPItest и COLtest. ASA необратимо ингибирует COX1 в тромбоцитах, тем самым подавляя выработку TXA2. Реагент ASA используется в качестве контроля качества при тестировании функции тромбоцитов с помощью Multiplate, позволяя оценивать аномальные реакции тромбоцитов в ASPItest и COLtest. [17]

Реагент-антагонист GPIIb/IIIa

Этот реагент используется в качестве контроля качества при многопластинчатом тестировании функции тромбоцитов. Антагонист GPIIb/IIIa блокирует связывание фибриногена с рецепторами GPIIb/IIIa, предотвращая образование связей тромбоцит-фибриноген и приводя к значительному снижению агрегации тромбоцитов в ответ на все агонисты. Реагент-антагонист используется вместе с TRAP-тестом и позволяет оценить положительный контроль. [18]

Реагент простагландина E1

Простагландин E1 (PGE1) — это ингибитор тромбоцитов , который вызывает увеличение циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) в тромбоцитах путем стимуляции активности аденилатциклазы . цАМФ — это внутриклеточная сигнальная молекула , а увеличение цАМФ ингибирует мобилизацию кальция и агрегацию тромбоцитов, вызванную активацией рецептора АДФ P2Y1. Активация рецептора P2Y1 инициирует агрегацию тромбоцитов в ответ на АДФ. Рецептор P2Y1 необходим для активации тромбоцитов, вызванной АДФ, но недостаточен для полной агрегации тромбоцитов в ответ на АДФ. [19] цАМФ ингибирует агрегацию тромбоцитов, а снижение количества цАМФ в тромбоцитах приводит к агрегации тромбоцитов. [20] Реагент PGE1 используется вместе с тестом на АДФ для двух целей: оценки высокой чувствительности к АДФ (HS) и положительного контроля теста на АДФ. Когда небольшое количество PGE1 (20 мкл) добавляется к ADPtest, это вызывает умеренное ингибирование агрегации в нормальных образцах, но значительно увеличивает чувствительность тромбоцитов к ингибированию клопидогрелем. Вот почему модифицированный тест называется «Высокочувствительный». Добавление 50 мкл PGE1 к ADPtest приводит к сильному ингибированию агрегации, индуцированной ADP, и используется для оценки положительных контролей ADPtest. [21]

Ссылки

  1. ^ Рануччи, Марко; Симиони, Паоло (20 января 2016 г.). Тесты на месте оказания помощи при тяжелом кровотечении: руководство по диагностике и лечению. Springer. стр.  40–42 . ISBN 978-3-319-24795-3.
  2. ^ Маркуччи, Карло; Шётткер, Патрик (17 сентября 2014 г.). Периоперационный гемостаз: коагуляция для анестезиологов. Springer. стр.  54–56 . ISBN 978-3-642-55004-1.
  3. ^ Albanyan, A; Al-Musa, A; AlNounou, R; Al Zahrani, H; Nasr, R; AlJefri, A; Saleh, M; Malik, A; Masmali, H; Owaidha, T (2015). «Диагностика тромбастении Гланцмана с помощью анализатора импеданса цельной крови (MEA) по сравнению с агрегометрией пропускания света». Международный журнал лабораторной гематологии . 37 (2015 август, 37(4)): 503–508 . doi :10.1111/ijlh.12320. PMID  25537026. S2CID  20964797.
  4. ^ Авиди, А; Макабла, А; Двейк, М; Бсоул, Н; Абу-Хадер, А (2009). «Сравнение агрегации тромбоцитов с использованием светопропускания и многоэлектродной агрегометрии при тромбастении Гланцмана». Platelets . 20 (2009 авг., 20(5)): 297– 301. doi :10.1080/09537100903006246. PMID  19548178. S2CID  36369739.
  5. ^ Valarche, V; Desconclois, C; Boutekedjiret, T; Dreyfus, M; Proulle, V (2011). «Многопластинчатая импедансная агрегометрия цельной крови: новый инструмент для болезни Виллебранда». Журнал тромбоза и гемостаза . 9 (2011 авг., 9(8)): 1645–7 . doi :10.1111/j.1538-7836.2011.04400.x. PMID  21679294. S2CID  32781368.
  6. ^ Sibbing, D; Morath, T; Braun, S; Stegherr, J; Mehilli, J; Vogt, W; Schömig, A; Kastrati, A; von Beckerath, N (2010). «Статус ответа на клопидогрель, оцененный с помощью анализа Multiplate point-of-care, а также частота и сроки тромбоза стента в течение шести месяцев после коронарного стентирования». Тромбоз и гемостаз . 103 (2010 январь, 103(1)): 151– 9. doi :10.1160/TH09-05-0284. PMID  20062919. S2CID  207716057.
  7. ^ Мишра, ПК; Теккудан, Дж; Сахаджанандан, Р; Грейвенор, М; Лакшманан, С; Фаяз, КМ; Лукраз, Х (2015). «Роль оценки функции тромбоцитов по месту оказания помощи в прогнозировании послеоперационного кровотечения и потребности в переливании после аортокоронарного шунтирования». Annals of Cardiac Anaesthesia . 18 (2015 Янв–Март, 18(1)): 45–51 . doi : 10.4103/0971-9784.148321 . PMC 4900327. PMID  25566711 . 
  8. ^ Kaiser, AF; Neubauer, H; Franken, CC; Krüger, JC; Mügge, A; Meves, SH (2012). «Какой антикоагулянт является лучшим для агрегометрического тестирования функции тромбоцитов цельной крови? Сравнение шести антикоагулянтов и различных условий хранения». Platelets . 23 (2012, 23(5)): 359–67 . doi :10.3109/09537104.2011.624211. PMID  21999185. S2CID  207491047.
  9. ^ Truss, NJ; Armstrong, PC; Liverani, E; Vojnovic, I; Warner, TD (2009). «Антикоагуляция крови гепарином, но не цитратом сохраняет функцию тромбоцитов в течение длительного времени». Журнал тромбоза и гемостаза . 7 ( 2009 ноябрь, 7(11)): 1897–905 . doi : 10.1111/j.1538-7836.2009.03589.x . PMID  19694945.
  10. ^ abcde Borhany, Мунира; Пахоре, Заен; ул Кадр, Зишан; Рехан, Мухаммед; Наз, Арши; Хан, Асиф; Ансари, Сакиб; Фарзана, Тасним; Надим, Мухаммед; Раза, Сайед Амир; Шамси, Тахир (2010). «Кровокровные нарушения в племени: результат кровного размножения». Сиротский журнал редких заболеваний . 5 (1). дои : 10.1186/1750-1172-5-23 . ISSN  1750-1172. ПМИД  20822539.
  11. ^ "ADPtest". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  12. ^ "ASPItest". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  13. ^ "COLtest". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  14. ^ "RISTOtest". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  15. ^ "RISTOtest". plateletfunctionresearch.com . Получено 17 февраля 2016 г. .
  16. ^ "TRAPtest". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  17. ^ "Реагент ASA". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  18. ^ "Реагент-антагонист GPIIb/IIIa". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
  19. ^ Hechler, B; Gachet, C (1988). "P2-рецепторы и функция тромбоцитов". Purinergic Signalling . 27 (2011 сентябрь, 7(3)): 293–303 . doi :10.1007/s11302-011-9247-6. PMC 3166986. PMID  21792575 . 
  20. ^ Ноэ, Л.; Питерс, К.; Иззи, Б.; Ван Гит, К.; Фресон, К. (2010). «Регуляторы уровней цАМФ в тромбоцитах: клинические и терапевтические последствия». Current Medicinal Chemistry . 17 (2010, 17(26)): 2897–905 . doi :10.2174/092986710792065018. PMID  20858171.
  21. ^ "PGE1 Reagent". Haemoview Diagnostics . Получено 17 февраля 2016 г.
Взято с "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Множественная_электродная_агрегометрия&oldid=1224199179"