Эндотелиальная прогениторная клетка (или EPC ) — это термин, который применяется к нескольким различным типам клеток, которые играют роль в регенерации эндотелиальной выстилки кровеносных сосудов . Эндотелиальные клетки роста — это подтип EPC, предназначенный для формирования эндотелиальных клеток. [1] Несмотря на историю и противоречия, EPC во всех своих формах остается перспективной целью исследований в области регенеративной медицины .
В процессе развития эндотелий возникает в тесном контакте с кроветворной системой . Это, а также существование гемогенного эндотелия , привело к вере и поиску взрослых гемангиобластоподобных или ангиобластоподобных клеток; клеток, которые могли бы дать начало функциональной сосудистой системе у взрослых. [2] Существование эндотелиальных прогениторных клеток предполагалось с середины двадцатого века, однако их существование не было подтверждено до 1990-х годов, когда Асахара и др. опубликовали открытие первого предполагаемого EPC. [3]
Недавно разгорелись споры по поводу определения истинных эндотелиальных предшественников. [4] Хотя клетки, полученные из костного мозга, по-видимому, локализуются в поврежденных сосудах и способствуют ангиогенному переключению, другие исследования показали, что эти клетки не вносят прямого вклада в функциональный эндотелий, а действуют через паракринные методы, обеспечивая поддержку резидентным эндотелиальным клеткам. [5] [6] Хотя некоторые другие авторы оспаривали это и утверждали, что они являются истинными EPC, [7] многие исследователи начали называть эти клетки клетками колониеобразующей единицы-Хилла (КОЕ-Хилл) или циркулирующими ангиогенными клетками (ЦАК) (в зависимости от метода выделения), подчеркивая их роль как гемопоэтических миелоидных клеток, участвующих в содействии росту новых сосудов. [8] [9]
Молекулярно-генетический анализ предполагаемых популяций EPC раннего отростка предполагает, что они действительно имеют моноцитоподобные паттерны экспрессии и поддерживают существование отдельной популяции предшественников, позднего отростка или эндотелиальной колониеобразующей клетки (ECFC). [10] Кроме того, клетки раннего отростка поддерживают другие функции моноцитов, такие как высокое поглощение Dil-Ac-LDL и туши и низкую экспрессию eNOS . Также показано, что эти исходные, ранние отростки, CFU-Hill или CAC экспрессируют CD14 , липополисахаридный рецептор, экспрессируемый моноцитами, но не эндотелиальными клетками. [11]
Клетки, образующие эндотелиальные колонии, представляют собой отдельную популяцию, которая, как было обнаружено, обладает потенциалом дифференцироваться и способствовать восстановлению сосудов. В настоящее время известно, что ECFC являются резидентными клетками-предшественниками у взрослых, которые сохраняют некоторую васкулогенную способность. [12]
По методу изоляции и функции клеток были описаны три основные популяции предполагаемых взрослых EPC. Поведение клеток можно найти в следующей таблице. [9] [13]
Поведение .. \\ .. Население | Колониеобразующая единица – Хилл | Циркулирующие ангиогенные клетки | Клетка, образующая эндотелиальную колонию |
---|---|---|---|
Клональный пролиферативный статус | - | - | + |
Возможность перекрытия | - | - | + |
Формирование трубок in vitro | +/- | +/- | + |
Формирование сосудов in vivo de novo | - | - | + |
Направление к ишемическим участкам in vivo | + | + | + |
Паракринная поддержка ангиогенеза | + | + | + |
EPC также имеют вариабельные фенотипические маркеры, используемые для идентификации. К сожалению, не существует уникальных маркеров для эндотелиальных предшественников, которые не были бы общими с другими эндотелиальными или гемопоэтическими клетками, что способствовало историческим спорам вокруг этой области. Подробный обзор современных маркеров можно найти в следующей таблице. [2] [13]
Маркер .. \\ .. Население | Колониеобразующая единица – Хилл | Циркулирующие ангиогенные клетки | Клетка, образующая эндотелиальную колонию |
---|---|---|---|
Экспрессия CD34 | +/- | +/- | +/- |
Экспрессия CD133 | + | + | - |
Экспрессия CD45 | +/- | +/- | - |
Экспрессия CD146 | +/- | +/- | + |
Экспрессия VE-кадгерина | +/- | +/- | ++ |
Экспрессия CD115 | + | + | - |
Экспрессия CD31 (PECAM) | + | + | + |
Экспрессия CD14 | + | + | - |
экспрессия CD105 | + | + | + |
Экспрессия CD117 (ckit) | + | + | +/- |
Экспрессия VEGFR1 | + | + | + |
Экспрессия VEGFR2 (KDR/Flk1) | + | + | ++ |
выражение TIE-2 | + | + | + |
Экспрессия CXCR4 | + | + | +/- |
выражение фактора фон Виллебранда | +/- | +/- | + |
АЛДГ | Яркий | Яркий | Яркий |
поглощение ЛПНП в ац | + | + | + |
Первоначально выделенная Асахарой и соавторами, популяция CFU-Hill представляет собой ранний отросток, сформированный путем высева мононуклеарных клеток периферической крови на покрытые фибронектином чашки Петри, что обеспечивает адгезию и истощение неприлипающих клеток, а также изоляцию отдельных колоний. [8] [9]
Аналогичный метод заключается в культивировании мононуклеарной фракции периферической крови в дополненной среде роста эндотелия, удалении не прилипших клеток и изоляции оставшихся. Хотя эти клетки демонстрируют некоторые эндотелиальные характеристики, они не образуют колоний. [8] [9]
Клетки, образующие эндотелиальные колонии , являются поздним типом клеток роста; то есть они изолируются только после значительно более длительного культивирования, чем клетки CFU-Hill. ECFC изолируются путем высевания мононуклеарной фракции периферической крови на покрытые коллагеном пластины, удаления неприлипших клеток и культивирования в течение недель до появления колоний с характерной морфологией булыжника. Эти клетки фенотипически похожи на эндотелиальные клетки и, как было показано, создают сосудоподобные структуры in vitro и in vivo. [8] [9]
Некоторые развивающиеся клетки могут быть похожими или такими же, как другие эндотелиальные предшественники, хотя обычно их не называют EPC. Гемангиобласты (или их аналог in vitro, клетки, образующие бластные колонии) — это клетки, которые, как полагают, дают начало как эндотелиальной, так и кроветворной системам на раннем этапе развития. Ангиобласты , как полагают, являются формой ранних предшественников или стволовых клеток, которые дают начало только эндотелию. Совсем недавно мезоангиобласты были теоретически предложены как клетки, дающие начало нескольким мезодермальным тканям. [14] [15] [16]
Эндотелиальные клетки-предшественники, вероятно, важны для роста опухоли и считаются критически важными для метастазирования и ангиогенеза. [17] [18] [19] Было проведено большое количество исследований предполагаемых EPC, полученных из костного мозга CFU-Hill. Абляция эндотелиальных клеток-предшественников в костном мозге приводит к значительному снижению роста опухоли и развития сосудистой сети. Это указывает на то, что эндотелиальные клетки-предшественники представляют собой новые терапевтические мишени. [20] Ингибитор связывания ДНК 1 ( ID1 ) использовался в качестве маркера для этих клеток; [21] это позволяет отслеживать EPC от костного мозга до крови, до опухолевой стромы и даже включать в сосудистую сеть опухоли.
Недавно было обнаружено, что miRNAs регулируют биологию EPC и ангиогенез опухоли. Эта работа Plummer et al. обнаружила, что в частности нацеливание miRNAs miR-10b и miR-196b привело к значительным дефектам в опосредованном ангиогенезом росте опухоли за счет снижения мобилизации проангиогенных EPCs в опухоль. Эти результаты указывают на то, что направленное нацеливание этих miRNAs в EPCs может привести к новой стратегии ингибирования ангиогенеза опухоли. [22]
Исследования показали, что ECFC и эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) обладают способностью к миграции опухолей и неоангиогенезу даже большей, чем другие гемопоэтические клетки CD34+ при имплантации мышам с иммунодефицитом, что позволяет предположить, что эндотелиальные предшественники играют ключевую роль, но дополнительно подтверждает важность обоих типов клеток в качестве мишеней для фармакологической терапии . [23]
Более высокие уровни циркулирующих «эндотелиальных прогениторных клеток» были обнаружены в кровотоке пациентов, предсказывали лучшие результаты, и у пациентов наблюдалось меньше повторных сердечных приступов, [24] хотя статистические корреляции между этими результатами и количеством циркулирующих эндотелиальных прогениторных клеток были скудными в первоначальном исследовании. Эндотелиальные прогениторные клетки мобилизуются после инфаркта миокарда, и они функционируют для восстановления выстилки кровеносных сосудов, поврежденных во время сердечного приступа.
Ряд небольших фаз клинических испытаний начали указывать на EPC как на потенциальное лечение различных сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Например, годичная «Трансплантация клеток-предшественников и усиление регенерации при остром инфаркте миокарда» (TOPCARE-AMI) изучала терапевтический эффект инфузии ex vivo расширенных EPC костного мозга и обогащенных культурой EPC, полученных из периферической крови, 20 пациентам с острым инфарктом миокарда (ИМ). Через четыре месяца были обнаружены значительные улучшения фракции выброса желудочков, геометрии сердца, резерва коронарного кровотока и жизнеспособности миокарда (Shantsila, Watson, & Lip). Аналогичное исследование изучало терапевтический эффект EPC при ишемии ног, вызванной тяжелым заболеванием периферических артерий. В ходе исследования образец крови, богатой EPC, вводился в икроножные мышцы 25 пациентов. Через 24 недели наблюдалось увеличение количества коллатеральных сосудов и улучшение восстановления перфузии крови. Также было отмечено улучшение состояния при болях в покое и при ходьбе без боли [25].
Роль эндотелиальных клеток-предшественников в заживлении ран остается неясной. Было замечено, что кровеносные сосуды входят в ишемическую ткань в процессе, вызванном механическим принудительным проникновением существующих капилляров в бессосудистую область, и, что важно, вместо прорастания ангиогенеза . Эти наблюдения противоречат прорастанию ангиогенеза, вызванного EPC. В совокупности с невозможностью найти эндотелий, полученный из костного мозга, в новой сосудистой системе, в настоящее время существует мало материальных подтверждений постнатального васкулогенеза. Вместо этого ангиогенез, вероятно, вызван процессом физической силы. [26]
При эндометриозе до 37% микрососудистого эндотелия эктопической эндометриальной ткани, по-видимому, происходит из эндотелиальных клеток-предшественников. [27]