Белок L
| Домен белка L b1 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
 Структура белка L, связывающегося с легкой цепью мышиного Fab ( PDB : 1MHH ). [1] | |||||||||||
| Идентификаторы | |||||||||||
| Символ | Ппл | ||||||||||
| Пфам | ПФ02246 | ||||||||||
| ИнтерПро | IPR003147 | ||||||||||
| СКОП2 | 1MHH / SCOPe / SUPFAM | ||||||||||
| |||||||||||
Белок L был впервые выделен с поверхности бактериального вида Peptostreptococcus magnus и, как было обнаружено, связывает иммуноглобулины посредством взаимодействия L-цепи , откуда и было предложено название. [2] Он состоит из 719 аминокислотных остатков. [3] Молекулярная масса белка L, очищенного из клеточных стенок Peptostreptoccus magnus, была впервые оценена как 95 кДа с помощью SDS-PAGE в присутствии восстановителя 2-меркаптоэтанола, в то время как молекулярная масса была определена как 76 кДа с помощью гель -хроматографии в присутствии 6 М гуанидина HCl. Белок L не содержит никаких межцепочечных дисульфидных петель и не состоит из дисульфидно-связанных субъединиц. Это кислая молекула с pI 4,0. [4] В отличие от белка A и белка G , которые связываются с Fc-областью иммуноглобулинов ( антител ), белок L связывает антитела посредством взаимодействий легких цепей . Поскольку никакая часть тяжелой цепи не участвует в связывающем взаимодействии, белок L связывает более широкий спектр классов антител, чем белок A или G. Белок L связывается с представителями всех классов антител, включая IgG , IgM , IgA , IgE и IgD . Одноцепочечные вариабельные фрагменты ( scFv ) и фрагменты Fab также связываются с белком L.
Несмотря на этот широкий диапазон связывания, белок L не является универсальным белком , связывающим антитела . Связывание белка L ограничивается теми антителами, которые содержат легкие цепи каппа. У людей и мышей большинство молекул антител содержат легкие цепи каппа (κ), а остальные имеют легкие цепи лямбда (λ). Белок L эффективен только в связывании определенных подтипов легких цепей каппа. Например, он связывает человеческие подтипы VκI, VκIII и VκIV, но не связывает подтип VκII. Связывание иммуноглобулинов мыши ограничивается теми, которые имеют легкие цепи VκI. [5]
Учитывая эти особые требования к эффективному связыванию, основное применение иммобилизованного белка L — очистка моноклональных антител из асцитов или супернатантов клеточных культур , которые, как известно, имеют легкую цепь каппа . Белок L чрезвычайно полезен для очистки моноклональных антител, содержащих VLκ, из супернатантов культур, поскольку он не связывает бычьи иммуноглобулины, которые часто присутствуют в средах в качестве добавки к сыворотке . Кроме того, белок L не мешает антигенсвязывающему сайту антитела, что делает его полезным для иммунопреципитационных анализов, даже с использованием IgM.
Ген белка L
Ген белка L содержит пять компонентов: сигнальную последовательность из 18 аминокислот; NH2-терминальную область («A») из 79 остатков; пять гомологичных повторов «B» из 72-76 аминокислот каждый; терминальную область COOH из двух дополнительных повторов «C» (по 52 аминокислоты каждый); гидрофильную, богатую пролином предполагаемую область, охватывающую клеточную стенку («W») после повторов C; гидрофобный мембранный якорь («M»). Было обнаружено, что повторы B (36 кДа) отвечают за взаимодействие с легкими цепями Ig. [2]
Другие белки, связывающие антитела
Помимо белка L, для очистки, иммобилизации или обнаружения иммуноглобулинов обычно используются другие иммуноглобулинсвязывающие бактериальные белки, такие как белок A , белок G и белок A/G . Каждый из этих иммуноглобулинсвязывающих белков имеет различный профиль связывания антител с точки зрения части антитела, которая распознается, а также вида и типа антител, которые он будет связывать.
Ссылки
- ^ Graille M, Harrison S, Crump MP, Findlow SC, Housden NG, Muller BH, Battail-Poirot N, Sibaï G, Sutton BJ, Taussig MJ, Jolivet-Reynaud C, Gore MG, Stura EA (декабрь 2002 г.). «Доказательства пластичности и структурной мимикрии на интерфейсе легкой цепи иммуноглобулина и белка L». J Biol Chem . 277 (49): 47500–6. doi : 10.1074/jbc.M206105200 . PMID 12221088.
- ^ Björck L (февраль 1988). «Белок L. Новый белок бактериальной клеточной стенки со сродством к цепям Ig L». J. Immunol . 140 (4): 1194–7. doi : 10.4049/jimmunol.140.4.1194 . PMID 3125250. S2CID 35781778.
- ^ Kastern W, Sjöbring U, Björck L (июнь 1992 г.). «Структура пептострептококкового белка L и идентификация повторяющегося домена связывания легкой цепи иммуноглобулина». J. Biol. Chem . 267 (18): 12820–5. doi : 10.1016/S0021-9258(18)42349-6 . PMID 1618782.
- ^ Akerström B, Björck L (ноябрь 1989). "Белок L: бактериальный белок, связывающий легкую цепь иммуноглобулина. Характеристика связывания и физико-химических свойств". J. Biol. Chem . 264 (33): 19740–6. doi : 10.1016/S0021-9258(19)47174-3 . PMID 2479638.
- ^ Nilson BH, Lögdberg L, Kastern W, Björck L, Akerström B (август 1993 г.). «Очистка антител с использованием структур каркаса связывания белка L в вариабельном домене легкой цепи». J. Immunol. Methods . 164 (1): 33–40. doi :10.1016/0022-1759(93)90273-a. PMID 8360508.
