Тест Клейхауэра–Бетке

Эта статья нуждается в более надежных медицинских ссылках для проверки или слишком сильно полагается на первоисточники . Пожалуйста, просмотрите содержание статьи и добавьте соответствующие ссылки, если можете. Не имеющие источника или плохо полученные материалы могут быть оспорены и удалены . Найти источники:  "Тест Кляйхауэра–Бетке" – новости  · газеты  · книги  · ученый  · JSTOR ( ноябрь 2021 г. )

Тест Клейхауэра–Бетке
Тест Клейхауэра, показывающий, что эритроциты плода окрашены в розовато-лиловый цвет, в то время как эритроциты взрослого человека видны только как «призраки»
Цель	измеряет передачу фетального гемоглобина

Тест Клейхауэра –Бетке («КБ») , окраска Клейхауэра–Бетке («КБ») , тест Клейхауэра или тест кислотного вымывания — это анализ крови, используемый для измерения количества фетального гемоглобина, перенесенного от плода в кровоток матери . ^[1] Обычно его проводят у резус-отрицательных матерей, чтобы определить необходимую дозу иммуноглобулина Rho(D) (RhIg) для ингибирования образования антител к резус-фактору у матери и предотвращения заболевания резус-фактора у будущих резус-положительных детей. ^[2] Он назван в честь Энно Клейхауэра и Клауса Бетке, которые описали его в 1957 году.

Тест KB является стандартным методом количественной оценки плодно-материнского кровотечения (FMH). Он использует дифференциальную устойчивость плодного гемоглобина к кислоте. Стандартный мазок крови готовится из крови матери и подвергается воздействию кислотной ванны. Это удаляет гемоглобин взрослого человека , но не плодный гемоглобин, из эритроцитов. Последующее окрашивание с использованием метода Шепарда ^[3] делает плодные клетки (содержащие плодный гемоглобин) розово-розовыми по цвету, в то время как взрослые эритроциты видны только как «призраки». Под микроскопом подсчитывают 2000 клеток и вычисляют процент плодных и материнских клеток. ^[2]

У тех, у кого тесты положительные, следует провести последующее тестирование при послеродовой проверке, чтобы исключить возможность ложноположительного результата . Это может быть вызвано гемоглобинопатией у матери, которая вызывает постоянное повышение уровня гемоглобина плода, например, признак серповидноклеточной анемии . ^[2]

Сравнение с другими более дорогими или технологически продвинутыми методами, такими как проточная цитометрия, показало, что окрашивание KB, как и более продвинутые методы, чувствительно в обнаружении FMH. ^[1] Однако публикации показали, что по сравнению с методами проточной цитометрии тест KB переоценивает FMH из-за ложноположительных результатов, когда в образце материнской крови присутствуют F-клетки. Ошибки фонового подсчета могут привести к оценкам потери крови плода до 5 мл , когда на самом деле такой потери крови нет, но стандартные методы, доступные в большинстве лабораторий, допускают крайне низкую вероятность возврата ложноположительного результата, когда имеет место более тяжелая FMH. ^[2]

Тонкие мазки готовятся из капиллярной или венозной крови, собранной в антикоагулянты, такие как гепарин , оксалат , цитрат или ЭДТА . Мазки высушиваются на воздухе в течение 10–60 минут, фиксируются в 80 об.% этаноле в течение 5 минут при температуре 20–22 °C, промываются водопроводной водой и высушиваются на воздухе. Затем пленки погружаются в цитратно-фосфатный буфер на 5 минут при температуре 37 °C и осторожно встряхиваются в течение примерно 3 минут. Предметные стекла промываются водопроводной водой, высушиваются и окрашиваются кислым гематоксилином Эрлиха в течение 3 минут, промываются водой и снова высушиваются. Их контрастно окрашивают эритрозином в течение 3 минут. После окончательного промывания пленки высушиваются и изучаются под световым микроскопом. ^[4]

Гемоглобиновые клетки F густо окрашены эритрозином, гемоглобиновые клетки A выглядят как клетки-призраки, а промежуточные клетки окрашены более или менее в розовый цвет. Ретикулоциты, содержащие гемоглобин A, могут выглядеть как промежуточные клетки и/или могут показывать внутриклеточную грануляцию. Тельца включения (тельца Гейнца, осажденные α-цепи или β-цепи) видны в элюированных клетках как компактные включения разного размера. Гемоглобин A элюируется независимо от того, является ли он оксигемоглобином, метгемоглобином, цианметгемоглобином, восстановленным гемоглобином или карбоксигемоглобином.

Рекомендуются методы, разработанные Шнайдером и Людвигом ^[5] и Барчем. Для определения внутриклеточного распределения гемоглобина F можно использовать полуколичественный метод Шепарда, Везеролла и Конли.

Нормальные значения F-клеток гемоглобина у взрослых, первоначально опубликованные Кляйхауэром, составляли менее 0,01%; у доношенных новорожденных они превышают 90%.

Чтобы определить, указывает ли положительный результат теста на ФМГ на вероятную причину гибели плода, следует рассчитать процент от общего объема потерянной плодом крови, внеся соответствующие коррективы на основе следующих известных соотношений:

• • размер эритроцита плода в 1,22 раза больше размера эритроцита взрослого человека;
  • Известно, что средний показатель успешности окрашивания КБ при обнаружении эритроцитов плода составляет 92%;
  • У женщины, находящейся на сроке беременности или близкой к нему, средний объем эритроцитов матери составляет приблизительно 1800 мл;
  • средний гематокрит плода составляет 50%; и
  • при мертворождении средний объем крови плода составляет 150 м л к г {\displaystyle 150{\frac {мл}{кг}}}

Эти ограничения затем можно применить для получения формулы

${\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}}$

где

• • ${\displaystyle ПФБ}$процент потери крови плодом;
  • ${\displaystyle ФК}$наблюдаемое количество эритроцитов плода;
  • ${\displaystyle MC}$— наблюдаемое количество эритроцитов у матери (обратите внимание, что , где — общее наблюдаемое количество эритроцитов у матери и плода);${\displaystyle MC=TC-FC}$${\displaystyle TC}$
  • ${\displaystyle ФВ}$масса мертворождённого плода в килограммах.

Оценка необходимого количества флаконов иммуноглобулина Rho(D) может предполагать следующие уравнения: ^[6]

• Объем (мл) фетальной крови = % фетальных клеток x 50
• Количество требуемых флаконов 300 мкг RhIG = Объем фетальной крови/30 мл

Объединение этих двух уравнений приводит к следующему: ^[6]

• Количество пробирок = % фетальных клеток x 50 / 30

Это приблизительно равно:

• Количество пробирок = % фетальных клеток x 1,7

На практике, если число справа от десятичной точки ≥5, оно округляется в большую сторону, чтобы добавить один флакон. ^[6]

Предположим, что проведено окрашивание KB и обнаружено общее количество эритроцитов, среди которых обнаружены эритроциты плода. Предположим далее, что вес мертворождения рассматриваемого плода составляет . Тогда мы придем к выводу, что общий процент потерянной плодом крови приблизительно равен:${\displaystyle TC=5000}$${\displaystyle ФК=200}$${\displaystyle FW=2.0кг}$

${\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}={\frac {(3200)(200)}{(2.0)(4800)}}={\frac {200}{3}}=66,667}$

до пяти значащих цифр . Следовательно, мы приходим к выводу, что рассматриваемый плод потерял 66,667% (две трети) своей крови через ФМГ. Как правило, мертворождение весьма вероятно при любом значении , особенно если плод внезапно теряет так много крови; в этом примере мы, следовательно, с большой вероятностью заподозрим ФМГ как причину мертворождения. Однако важно отметить, что такой диагноз все еще не является полностью окончательным; плоды, теряющие большое количество крови в течение длительных периодов времени, способны компенсировать эту более медленную потерю крови; поскольку окраска КБ ничего не говорит нам относительно уровня остроты ФМГ. Это означает, что невозможно полностью сопоставить положительную окраску КБ и высокую с мертворождением, хотя во многих случаях, учитывая другую информацию, такую ​​как известные наследственные осложнения беременности, наблюдались чрезвычайно высокие положительные коэффициенты корреляции между ФМГ и мертворождением. ^{[ необходима цитата ]}${\displaystyle PFB\geq 20}$${\displaystyle ПФБ}$ ${\displaystyle r\приблизительно +1.000}$

Поскольку продолжительность жизни фетальных и материнских кровяных клеток в материнском кровотоке одинакова, можно получить информативные результаты с помощью окраски KB в течение достаточно длительного периода времени после мертворождения. Однако, если мать и плод несовместимы по системе ABO , более важно быстро выполнить окраску KB после мертворождения, поскольку фетальные эритроциты быстро выводятся из материнского кровотока, в результате чего окраска KB недооценивает степень FMH, если таковая имеется. В литературе высказывалось много опасений относительно ложноположительных результатов при взятии проб после родов. В целом это не проблема. Роды действительно приводят к более высокой частоте обнаружения микрокровоизлияний, но это не должно мешать интерпретации FMH как возможной причины мертворождения. Нет необходимости брать образец до индукции, начала родов, родов, отделения плаценты и т. д., несмотря на то, что утверждается в некоторых опубликованных источниках. Однако, если будет использоваться кесарево сечение, отсутствие взятия образца до этого приведет к 2% ложноположительным результатам. ^{[ необходима ссылка ]}

Наконец, все, что вызывает сохранение фетального гемоглобина в клетках крови матери, значительно усложнит интерпретацию. Определенные гемоглобинопатии , наиболее распространенной из которых является серповидноклеточная анемия, делают это. В целом, где-то в 1–3% случаев это может привести к ложной интерпретации.

В статье, опубликованной в 2004 году, сделан вывод о том, что тест Кляйхауэра-Бетке (KB) необходим во всех случаях материнской травмы, поскольку клиническая оценка недостаточно чувствительна для определения риска преждевременных родов. Он точно предсказывает риск преждевременных родов после материнской травмы, тогда как в статье сделан вывод о том, что клиническая оценка этого не делает. При отрицательном тесте KB продолжительность посттравматического электронного мониторинга плода может быть безопасно ограничена. При положительном тесте KB значительный риск преждевременных родов требует детального мониторинга. Тест KB имеет важные преимущества для всех жертв материнской травмы, независимо от резус-фактора. ^[7]

• Тест на пригодность

• [1] Тест Клейхауэра