Парацитофагия (от древнегреческого para «рядом», kytos «клетка» и phagy «поедание») — клеточный процесс, при котором клетка поглощает выступ, который выступает из соседней клетки. Этот выступ может содержать материал, который активно передается между клетками. Процесс парацитофагии [1] был впервые описан как решающий шаг во время межклеточного распространения внутриклеточного бактериального патогена Listeria monocytogenes , а также часто наблюдается у Shigella flexneri . Парацитофагия позволяет этим внутриклеточным патогенам распространяться непосредственно из клетки в клетку, таким образом избегая иммунного обнаружения и уничтожения. Исследования этого процесса внесли значительный вклад в наше понимание роли актинового цитоскелета в эукариотических клетках .
Актин является одним из основных белков цитоскелета в эукариотических клетках. Полимеризация актиновых филаментов отвечает за образование псевдоподий , филоподий и ламеллиподий во время клеточной подвижности . Клетки активно строят актиновые микрофиламенты, которые толкают клеточную мембрану в направлении продвижения. [2]
Факторы зародышеобразования являются усилителями полимеризации актина и способствуют формированию тримерного ядра полимеризации. Это структура, необходимая для инициирования процесса полимеризации актиновых нитей стабильным и эффективным способом. Факторы зародышеобразования, такие как WASP (белок синдрома Вискотта-Олдрича), помогают формировать комплекс зародышеобразования Arp2/3 из семи белков , который напоминает два мономера актина и, следовательно, облегчает формирование ядра полимеризации. Arp2/3 способен закрывать задний («минус») конец актиновой нити, обеспечивая более быструю полимеризацию на «плюс» конце. Он также может связываться со стороной существующих нитей, способствуя разветвлению нитей. [3]
Некоторые внутриклеточные патогены, такие как виды бактерий Listeria monocytogenes и Shigella flexneri, могут манипулировать полимеризацией актина клетки-хозяина, чтобы перемещаться через цитозоль и распространяться на соседние клетки (см. ниже). Исследования этих бактерий, особенно белка, индуцирующего сборку актина Listeria (ActA), привели к дальнейшему пониманию действий WASP. ActA является фактором, способствующим зародышеобразованию, который имитирует WASP. Он экспрессируется поляризованным к заднему концу бактерии, позволяя опосредованному Arp2/3 зародышеобразованию актина. Это толкает бактерию в переднем направлении, оставляя за собой «хвост кометы» актина. В случае Shigella , который также перемещается с помощью хвоста кометы актина, бактериальный фактор привлекает WASP клетки-хозяина, чтобы способствовать зародышеобразованию актина. [2] [3]
Клетки могут обмениваться материалом посредством различных механизмов, таких как секреция белков , высвобождение внеклеточных везикул, таких как экзосомы или микровезикулы , или более непосредственное поглощение частей соседних клеток. В одном примере было показано, что филоподий -подобные выступы или туннелирующие нанотрубки, направленные к соседним клеткам в культуре клеток PC12 крысы, облегчают транспорт органелл посредством временного слияния мембран. [4] В другом примере во время хоминга костного мозга клетки окружающей кости поглощают части гемопоэтических клеток костного мозга. Эти остеобласты контактируют с гемопоэтическими стволовыми клетками-предшественниками через мембранные нанотрубки, и части донорских клеток со временем переносятся в различные эндоцитарные отсеки целевых остеобластов. [5]
Отдельный процесс, известный как трогоцитоз , обмен липидными плотами или мембранными участками между иммунными клетками, может способствовать ответу на чужеродные стимулы. [6] Более того, было показано, что экзосомы доставляют не только антигены для перекрестной презентации , [7] но также MHCII и костимулирующие молекулы для активации лимфоцитов Т. [8] В неиммунных клетках было показано, что митохондрии могут обмениваться между клетками для спасения метаболически нежизнеспособных клеток, лишенных митохондрий. [9] Митохондриальный перенос также наблюдался в раковых клетках. [10]
Аргосомы происходят из базолатеральных эпителиальных мембран и обеспечивают связь между соседними клетками. Впервые они были описаны у Drosophila melanogaster , где они действуют как транспортное средство для распространения молекул через эпителий имагинальных дисков. [11] Меланосомы также переносятся филоподиями из меланоцитов в кератиноциты. Этот перенос включает классический путь формирования филоподий, при этом ключевыми факторами являются Cdc42 и WASP. [12]
Аргосомы, меланосомы и другие примеры эпителиального переноса сравнивались с процессом парацитофагии, и все они могут рассматриваться как особые случаи межклеточного переноса материала между эпителиальными клетками. [4]
Два основных примера парацитофагии — это способы передачи от клетки к клетке Listeria monocytogenes и Shigella flexneri . В случае Listeria этот процесс был впервые подробно описан с использованием электронной микроскопии [13] и видеомикроскопии. [1] Ниже приводится описание процесса передачи от клетки к клетке Listeria monocytogenes , в первую очередь основанное на Robbins et al . (1999): [1]
В уже инфицированной «донорской» клетке бактерия Listeria экспрессирует ActA , что приводит к образованию хвоста актиновой кометы и перемещению бактерии по цитоплазме . Когда бактерия сталкивается с мембраной донорской клетки , она либо отскакивает от нее, либо прилипает к ней и начинает выталкиваться наружу, растягивая мембрану и образуя выступ размером 3–18 мкм. Считается, что тесное взаимодействие между бактерией и мембраной клетки-хозяина зависит от Эзрина , члена семейства мембранно-ассоциированных белков ERM . Эзрин прикрепляет бактерию, движимую актином, к плазматической мембране путем сшивания хвоста актиновой кометы с мембраной и поддерживает это взаимодействие на протяжении всего процесса выпячивания. [14]
Поскольку нормальным местом заражения является столбчатый эпителий кишечника , клетки плотно упакованы, и выступ одной клетки легко протолкнется в соседнюю «целевую» клетку, не разрывая мембрану целевой клетки или мембрану выступов донора. В этот момент бактерия на кончике выступа начнет совершать «судорожные движения», вызванные продолжающейся полимеризацией актина в ее задней части. Через 7–15 минут мембрана донорской клетки отщипывается, и судорожные движения прекращаются на 15–25 минут из-за истощения АТФ. Затем целевая мембрана отщипывается (это занимает 30–150 секунд), и внутри цитоплазмы целевой клетки образуется вторичная вакуоль, содержащая бактерию.
В течение 5 минут целевая клетка становится инфицированной, когда вторичная вакуоль начинает закисляться, а внутренняя (полученная из донорской клетки) мембрана разрушается под действием бактериальных фосфолипаз (PI-PLC и PC-PLC). Вскоре после этого внешняя мембрана разрушается в результате действия бактериального белка листериолизина O [15] , который прокалывает вакуолярную мембрану. Облако остаточного актина, полученного из донорской клетки, сохраняется вокруг бактерии в течение 30 минут. Бактериальная металлопротеаза Mpl расщепляет ActA в зависимости от pH, пока бактерия все еще находится в закисленной вторичной вакуоли, но новая транскрипция ActA не требуется, поскольку уже существующая мРНК ActA может быть использована для трансляции нового белка ActA. Бактерия восстанавливает подвижность, и инфекция продолжается.
Наиболее тяжелые симптомы листериоза возникают из-за поражения центральной нервной системы (ЦНС). К таким тяжелым и часто смертельным симптомам относятся менингит , ромбэнцефалит и энцефалит . Эти формы заболевания являются прямым результатом механизмов патогенности листерий на клеточном уровне. [16] Листериозная инфекция, поражающая ЦНС, может происходить тремя известными путями: через кровь, через внутриклеточную доставку или через нейрональное внутриклеточное распространение. Парацитофагическое распространение от клетки к клетке обеспечивает листериям доступ к ЦНС посредством последних двух механизмов. [17]
В периферических тканях Listeria может проникать в клетки, такие как моноциты и дендритные клетки, из инфицированных эндотелиальных клеток посредством парацитофагического способа проникновения. Используя эти фагоцитарные клетки в качестве векторов, Listeria перемещается по нервам и достигает тканей, обычно недоступных для других бактериальных патогенов. Подобно механизму, наблюдаемому при ВИЧ , инфицированные лейкоциты в крови пересекают гематоэнцефалический барьер и переносят Listeria в ЦНС. Попав в ЦНС, распространение от клетки к клетке вызывает сопутствующие повреждения, приводящие к мозговому энцефалиту и бактериальному менингиту. Listeria использует фагоцитарные лейкоциты в качестве « троянского коня » [18], чтобы получить доступ к большему диапазону целевых клеток.
В одном исследовании мыши, которым вводили гентамицин через инфузионный насос, продемонстрировали поражение ЦНС и мозга во время заражения Listeria , что указывает на то, что популяция бактерий, ответственных за тяжелый патогенез, находилась внутри клеток и была защищена от циркулирующего антибиотика . [19] [20] Макрофаги, инфицированные Listeria, легче передают инфекцию нейронам посредством парацитофагии, чем посредством внеклеточного вторжения свободных бактерий. [21] Механизм, который конкретно нацеливает эти инфицированные клетки на ЦНС, в настоящее время неизвестен. Эта функция троянского коня также наблюдается и считается важной на ранних стадиях инфекции, когда инфекция от кишечника до лимфатических узлов опосредуется инфицированными дендритными клетками. [22]
Второй механизм достижения мозговой ткани достигается посредством внутриаксонального транспорта. В этом механизме Listeria перемещается по нервам в мозг, что приводит к энцефалиту или поперечному миелиту. [23] У крыс ганглии задних корешков могут быть инфицированы Listeria напрямую , и бактерии могут перемещаться как в ретроградном, так и в антероградном направлении через нервные клетки. [24] Конкретные механизмы, участвующие в заболевании мозга, пока не известны, но считается, что парацитофагия играет определенную роль. Не было показано, что бактерии эффективно инфицируют нейрональные клетки напрямую, и ранее описанная передача макрофагов считается необходимой для этого способа распространения. [21] [25]
Процесс парацитофагии считается отличным от похожих, но не связанных между собой процессов, таких как фагоцитоз и трогоцитоз . Некоторые связанные концепции включают: