В биологии клетки зарождение микротрубочек является событием, которое инициирует de novo формирование микротрубочек (МТ). Эти нити цитоскелета обычно формируются посредством полимеризации α- и β- димеров тубулина , основных строительных блоков микротрубочек, которые первоначально взаимодействуют для зарождения семени, из которого удлиняется нить. [1]
Зарождение микротрубочек происходит спонтанно in vitro , при этом растворы очищенного тубулина дают начало полноразмерным полимерам. Димеры тубулина, из которых состоят полимеры, обладают внутренней способностью к самоагрегации и сборке в цилиндрические трубки при условии достаточного запаса ГТФ. Однако кинетические барьеры такого процесса означают, что скорость, с которой микротрубочки спонтанно зарождаются, относительно низкая. [2]
In vivo клетки обходят этот кинетический барьер, используя различные белки для содействия зарождению микротрубочек. Основной путь, посредством которого зарождение микротрубочек происходит, требует действия третьего типа тубулина, γ-тубулина , который отличается от субъединиц α и β, из которых состоят сами микротрубочки. γ-тубулин объединяется с несколькими другими ассоциированными белками, образуя коническую структуру, известную как кольцевой комплекс γ-тубулина (γ-TuRC). Этот комплекс с его 13-кратной симметрией действует как каркас или матрица для димеров α/β тубулина во время процесса зарождения, ускоряя сборку кольца из 13 протофиламентов , составляющих растущую микротрубочку. [3] γ-TuRC также действует как колпачок (−) конца, в то время как микротрубочка продолжает рост со своего (+) конца. Этот колпачок обеспечивает как стабильность, так и защиту (-) конца микротрубочки от ферментов, которые могут привести к его деполимеризации, а также ингибирует рост (-) конца.
γ-TuRC обычно обнаруживается как основная функциональная единица в центре организации микротрубочек (MTOC), таком как центросома в некоторых клетках животных или веретенообразные тела у грибов и водорослей . γ-TuRC в центросоме зарождают массив микротрубочек в интерфазе , которые расширяют свои (+)-концы радиально наружу в цитоплазму по направлению к периферии клетки. Помимо других функций, этот радиальный массив используется моторными белками на основе микротрубочек для транспортировки различных грузов, таких как везикулы, к плазматической мембране.
Центросома является наиболее распространенным ЦОМТ для мультипотентных клеток у животных, при этом дифференцированные ткани используют широкий спектр нецентросомных ЦОМТ.
В клетках животных, претерпевающих митоз , аналогичный радиальный массив образуется из двух ЦМТ, называемых полюсами веретена , которые производят биполярное митотическое веретено. Однако некоторые клетки, такие как клетки высших растений и ооцитов, не имеют отдельных ЦМТ, и микротрубочки зарождаются через нецентросомный путь. Другие клетки, такие как нейроны, клетки скелетных мышц и эпителиальные клетки, которые имеют ЦМТ, обладают массивами микротрубочек, не связанных с центросомой. [4] Эти нецентросомные массивы микротрубочек могут принимать различные геометрии, такие как те, которые приводят к длинной, тонкой форме миотрубочек , тонким выступам аксона или сильно поляризованным доменам эпителиальной клетки .
В эпителиальных клетках CAMSAP3 действует как нецентросомный MTOC и локализуется в апикальной мембране клетки. [5] Микротрубочки растут из этого домена параллельными линиями, придавая клетке прямоугольную форму.
Ранние клетки эмбриона мыши до имплантации используют уникальный нецентросомный MTOC в форме интерфазного мостика микротрубочек, соединяющего сестринские клетки. Этот интерфазный мостик организует микротрубочки обеих клеток и использует CAMSAP3 для связывания минус-концов микротрубочек. [6]
В кортикальном массиве растений, а также в аксонах нейронов, предполагается, что микротрубочки зарождаются из существующих микротрубочек посредством действия разделяющих ферментов, таких как катанин . [7] Подобно действию кофилина при создании массивов актиновых филаментов, разделение микротрубочек MAP создает новые плюсовые (+) концы, из которых могут расти микротрубочки. Таким образом, динамические массивы микротрубочек могут быть созданы без помощи γ-TuRC.
Исследования с использованием экстрактов яиц Xenopus выявили новую форму зарождения микротрубочек, которая генерирует веерообразные разветвленные массивы, в которых новые микротрубочки растут под углом от старых микротрубочек. Эти разветвленные микротрубочки сохраняют ту же полярность, что и их материнские микротрубочки, и их сборка включает связывание нецентросомных γ-TuRC со сторонами существующих микротрубочек через комплекс аугмина . Этот метод зарождения микротрубочек, зависящего от микротрубочек, приводит к быстрому увеличению плотности микротрубочек. [8]
Зарождение разветвленных микротрубочек наблюдалось у многочисленных организмов как в растительном, так и в животном мире. Используя микроскопию TIRF , исследователи визуально наблюдали зарождение разветвленных микротрубочек в клетках Drosophila во время формирования митотического веретена. [9] Было идентифицировано пять белков Drosophila (DGT2 через DGT6), которые необходимы и отвечают за облегчение локализации γ-тубулина в существующих МТ и не связаны с его локализацией в центросоме. [10]
Хотя γ-TuRC является основным белком, используемым для зарождения микротрубочек, это не единственный белок, который действует как фактор зарождения. Несколько других MAP помогают γ-TuRC в процессе зарождения, в то время как другие зарождают микротрубочки независимо от γ-TuRC. В зарождении с разветвлением, описанном выше, добавление TPX2 к экстрактам яиц привело к резкому увеличению событий зарождения — в то время как в других исследованиях белок XMAP215 , in vitro , зарождал звезды микротрубочек, а его истощение in vivo снижало потенциал зарождения центросом. [11] Связывающий микротрубочки белок даблкортин , in vitro , зарождает микротрубочки — действуя путем связывания с боковой стороной, а не с концом растущих микротрубочек. [12] Таким образом, в клетках может существовать семейство белков-факторов нуклеации, которые используют различные механизмы для снижения энергетических затрат на нуклеацию микротрубочек. Недавние исследования предоставили доказательства в пользу концепции, что стимуляция нуклеации микротрубочек возможна при сочетании димеров α- и β- тубулина и вышеупомянутого MAP TPX2 , даже при отсутствии γ-TuRC. [13]
Несколько белков участвуют в форматировании γ-TuRC и временном и пространственном контроле зарождения микротрубочек. К ним относятся, например, спирально-спиральные белки со структурными функциями и регуляторные белки, такие как компоненты цикла Ran . NEDD1 привлекает γ-TuRC в центросому , связываясь с γ-тубулином. [14] [15]