Мембранные контактные участки ( MCS ) представляют собой близкое соприкосновение двух органелл . Ультраструктурные исследования обычно выявляют межмембранное расстояние порядка размера одного белка , всего 10 нм или шире, без четкого верхнего предела. Эти зоны соприкосновения в высокой степени сохраняются в ходе эволюции . [1] Считается, что эти участки важны для облегчения передачи сигналов , и они способствуют прохождению малых молекул, включая ионы , липиды [2] и (открытые позже) активные формы кислорода . [3] [4] MCS важны для функционирования эндоплазматического ретикулума (ER), [5] поскольку это основное место синтеза липидов в клетках. [6] ER тесно контактирует со многими органеллами, включая митохондрии , аппарат Гольджи , эндосомы , лизосомы , пероксисомы , хлоропласты и плазматическую мембрану . [7] И митохондрии, и сортирующие эндосомы претерпевают значительные перестройки, приводящие к делению, где они контактируют с ЭР. [5] Места близкого прилегания могут также образовываться между большинством этих органелл в большинстве парных комбинаций. [8] Первые упоминания об этих контактных местах можно найти в работах, опубликованных в конце 1950-х годов, в основном визуализированных с использованием методов электронной микроскопии (ЭМ). Коупленд и Далтон описали их как «высокоспециализированную трубчатую форму эндоплазматического ретикулума, связанную с митохондриями и, по-видимому, в свою очередь, с сосудистой границей клетки». [9]
MCS между ER и PM существуют в разных типах клеток от нейронов до мышечных клеток , от Homo sapiens до Saccharomyces cerevisiae . Некоторые исследования показали, что в каждой дрожжевой клетке присутствует более 1000 контактных участков, а расстояние между липидным бислоем составляет от 10 до 25 нм (порядок размера одного белка ). Контактные участки PM-ER связаны с основными функциями MCS: синтезом липидов , транспортом липидов и гомеостазом кальция . [3] Был разработан набор молекулярных инструментов (например, LiMETER и MAPPER) для маркировки и управления образованием соединений ER-PM в живых клетках. [10] [11]
Неравномерное распределение стеролов среди мембран клеточных органелл во многом зависит от невезикулярного пути переноса. Например, в ЭР, где они синтезируются, они составляют около 5%, но они гораздо более концентрированы в ПМ, где они составляют более 30% содержания липидов . [12]
Поскольку липиды нерастворимы в воде (например, стерины <100 нМ), а спонтанное межслоевое и трансслоевое движение липидов имеет полупериод от 1-2 ч до 10 3 ч, общепринято, что транспортировка липидов должна осуществляться белками-переносчиками липидов (LTP) наряду с везикулярной транспортировкой, которая не является основным маршрутом для стеринов. Было идентифицировано несколько семейств LTP: они могут переносить липидную молекулу, защищая ее липофильные цепи от водной среды цитозоля . [ 7]
OSBP является наиболее широко изученным членом семейства белков, связанных с оксистерол-связывающим белком (OSBP) ( ORP ). Впервые он был описан как цитоплазматический рецептор для 25-гидроксихолестерина, [13] и спустя более 20 лет было показано, что это белок, регулируемый холестерином в комплексе с ERK . [14] Теперь, после описания структурной основы для восприятия и транспорта стеролов, [15] известно, что члены семейства белков ORP необходимы для сигнализации стеролов и функций транспорта стеролов. Их особая структура характеризуется консервативной β-бочкообразной стерол-связывающей складкой с дополнительными доменами , которые могут быть нацелены на множественные мембраны органелл.
У дрожжей Osh4 является гомологом OSBP, кристаллическая структура которого, полученная как в связанном со стеролом, так и в несвязанном состоянии, показала растворимый белок β-бочонка с гидрофильной внешней поверхностью и гидрофобным карманом, который может нести одну молекулу стерола. Семь гомологов OSBP (белков OSH) были идентифицированы в Saccharomyces cerevisiae , в которых их роль, как предполагалось, была больше связана с организацией стеролов в PM, а не с транспортировкой стеролов из ER. [3] Кроме того, Стефан и др. показали, что белки OSH контролируют метаболизм PI4P через фосфатидилинозитол (PI) 4-фосфатазу Sac1 . Они также предложили механизм регуляции Sac1: высокие уровни фосфатидилинозитол 4-фосфата (PI4P) на плазматической мембране привлекают Osh3 в сайты контакта PM-ER через его домен гомологии плекстрина (PH) ; Osh3 теперь активен и может взаимодействовать с белками VAP Scs2/Scs22, находящимися в ЭР, через свой мотив FFAT (два фенилаланина в кислом тракте), в конечном итоге активируя локализованный в ЭР Sac1 для снижения уровней PI. [16]
Ассоциированные с VAMP белки ( VAP ) являются высококонсервативными интегральными мембранными белками ER, участвующими в различных клеточных функциях. Они локализуются в ER, и их способность взаимодействовать с несколькими липид-переносящими, липид-связывающими или липид-чувствительными белками, содержащими мотив FFAT , предполагает, что VAP играют роль в транспорте липидов в MCS. Scs2 взаимодействует с Osh1, Osh2 и Osh3. Различные VAP могут быть партнерами в контактных участках между различными органеллами. [17] [18]
Контактные сайты PM-ER играют хорошо известную роль в контроле динамики кальция . Основным внутриклеточным пулом кальция является ER, и его высвобождение может быть вызвано различными стимулами. В возбудимых клетках связь между деполяризацией PM и высвобождением из внутриклеточных пулов необходима для генерации сигнализации Ca 2+ . В мышечных клетках , в триаде , юнктофилин , интегральный мембранный белок ER , участвует в стабилизации контакта ER-PM, взаимодействуя с PIP в PM. В этих контактных сайтах потенциалзависимые каналы Ca 2+ (VGCC) активируют близко расположенные рианодиновые рецепторы, экспрессируемые на ER, чтобы вызвать высвобождение кальция во время сопряжения возбуждения и сокращения . Однако уровни кальция необходимо строго контролировать во всех типах клеток. Невозбудимые клетки регулируют приток кальция через кальциевые каналы PM, определяя уровни кальция в просвете ER ( каналы, активируемые высвобождением кальция ). ORAI1 является молекулярным компонентом CRAC и взаимодействует с STIM1, белком ER. STIM1 может быстро перемещаться к месту контакта PM-ER после истощения запасов ER. [3]
Контактные сайты между внешней митохондриальной мембраной и ER присутствуют во многих организмах . [2] Около 100 таких контактных сайтов существуют между ER и митохондриями на клетку дрожжей . [3] Фракция ER, которая очищается совместно с митохондриями, так называемая митохондриально-ассоциированная эндоплазматическая ретикулумная мембрана (MAM), была тщательно изучена в течение последнего десятилетия. В «гипотезе MAM» было высказано предположение, что в центре патогенеза болезни Альцгеймера находится нарушение контактов ER-митохондрий, а не амилоидные бляшки или нейрофибриллярные клубки . [19]
Наличие ферментов, участвующих в биосинтезе фосфолипидов во фракции МАМ, известно с 1970-х годов, а синтез некоторых фосфолипидов завершается в обеих органеллах. Например, биосинтетический путь фосфатидилхолина включает различные этапы, некоторые на ЭР, а некоторые на внутренней митохондриальной мембране . Коннерт и др. идентифицировали Ups1 как дрожжевой LTP, который может переносить фосфатидную кислоту (PA) между митохондриальными мембранами: они показали, что эффективный перенос липидов требует взаимодействия Ups1 с Mdm35 для преобразования фосфатидной кислоты в кардиолипин во внутренней мембране . Кроме того, они предположили существование регуляторного механизма обратной связи , который ограничивает накопление кардиолипина в митохондриях: высокие концентрации кардиолипина в конечном итоге ингибируют его синтез и импорт PA в митохондрии. [20] Другое исследование Лахири и др. продемонстрировали, что потеря контактов между ЭР и митохондриями приводит к серьезному снижению митохондриального биосинтеза фосфатидилэтаноламина (ФЭ) из-за снижения транспорта фосфатидилсерина (ФС), который является предшественником синтеза ФЭ. [21]