Иммунозависимые гуанозинтрифосфатазы или IRG — это белки, активируемые в рамках раннего иммунного ответа. IRG были описаны у различных млекопитающих, но наиболее хорошо охарактеризованы у мышей. Активация IRG в большинстве случаев вызвана иммунным ответом и приводит к устранению определенных патогенов.
Интерферон (IFN)-индуцируемые ГТФазы охватывают четыре семейства белков, включая белки, устойчивые к миксовирусу (Mx), гуанилатсвязывающие белки (GBP), белки ГТФазы, связанные с иммунитетом (IRGs), и очень большие индуцируемые ГТФазы (VLIG). IRGs обеспечивают устойчивость от вакуолярных патогенов , локализуясь и разрушая фагоцитарную вакуоль во время инфекции. Активация IRGs у мышей индуцируется интерфероном . Гены IRG были идентифицированы у различных позвоночных и некоторых беспозвоночных . Они участвуют в важной иммунной защите от внутриклеточных патогенов и в результате стали мишенью для иммунного уклонения этих патогенов. Было показано, что внутриклеточный простейший паразит Toxoplasma gondii нацеливается на IRGs у мышей, обеспечивая устойчивость со стороны иммунного ответа хозяина.
IRG произошли от беспозвоночных
Исследования по определению эволюционного происхождения позвоночных привели к пониманию развития процессов иммунной системы и, кроме того, ответили на вопросы о том, как и почему патогены научились обходить и отключать эти селективные генетические признаки. Восемь функциональных и четыре псевдогена IRG были идентифицированы у беспозвоночного Branchiostoma floridiae . [1] Ли и др. определили паттерны экспрессии функциональных генов ГТФазы, индуцируемых IFN, у Branchiostoma japonicum в различных иммунологических сайтах при индуцировании патогенами и патогенными веществами. Эти данные свидетельствуют о том, что IRG могут функционировать в иммунологически связанной способности у цефалохордовых . Парадокс остается в том, что эти IRG функционируют без индукции путями активации IFN, поскольку B. japonicum и другие виды amphioxus не обладают генами IFN и рецепторов IFN. [2] Возможно, что IRG существовали до кембрийского взрыва как врожденный иммунный механизм, а с развитием адаптивной иммунной системы у позвоночных IFN развился для модуляции функции IRG.
Позвоночные развили целый массив генов IRG, возможно, из-за эволюции между различными взаимодействиями патогенов. У мыши C57BL/6 имеется 23 гена IRG, из которых 21 может быть функциональным в устойчивости к патогенам (6 хорошо охарактеризованы), [3] тогда как у людей развился только 1 функциональный ген IRG (IRGM) и один псевдоген . [4] Исследования на мышах охарактеризовали важность эффекторной молекулы типа 2 IFNγ в различных типах клеток [5] [6] и продолжили определять важность этих белков в устойчивости к внутриклеточным патогенам. [7]
Ортологичные гены Irgc (также известные как Cinema) обнаружены у людей и мышей. Эти ортологи не индуцируются IFN и экспрессируются только в семенниках обоих млекопитающих. [3] Множественные гены IRG были идентифицированы у собак и данио-рерио, но несколько — у модельного организма Tetraodontidae (рыба-собака). Считается, что гены IRG у людей были утеряны в ходе расхождения приматов. [1] [3] Различия между видами и внутри видов указывают на высокую скорость эволюционных изменений для этого конкретного элемента взаимодействия хозяина и патогена и подчеркивают важность понимания ограничений использования модельных систем для изучения иммунологии человека.
Зависимость от IRG лучше всего проиллюстрирована в исследованиях на мышах. Было проведено множество исследований с использованием моделей с нокаутом мыши для определения функции IRG. Были определены механизмы очистки патогена посредством созревания лизосом и разрушения вакуолей. Кроме того, IRG участвуют в контроле гемопоэтического баланса во время инфекции. Мыши с нокаутом Irg1 , инфицированные Mycobacterium, привели к панцитопении в результате неадекватного расширения гемопоэтических стволовых клеток . [8]
Геном мыши кодирует 23 IRG, некоторые из которых, как было продемонстрировано, широко экспрессируются (печень, сердце, селезенка, кишечник, тимус, легкие, яички, почки, мозг, кожа) в ряде типов клеток [9] и значительно повышаются после воздействия мощной иммунной эффекторной молекулы интерферона гамма , IFNγ. [10] IRG подразделяются на два дополнительных класса в зависимости от способа активности и механизма. Класс GSK (Irga6, Irgb6 и Irgd) считается канонической группой ГТФаз , тогда как вторая группа белков GMS, которые имеют мутацию лизина в метионин в активном центре , функционирует для предотвращения преждевременной активации путем ассоциации с мотивом связывания нуклеотидов способом, аналогичным ингибиторам диссоциации гуанозиновых нуклеотидов (GDI). [11] [12] Субклеточная локализация IRG вариабельна; Irga6 и Irgm3 преимущественно обнаруживаются в эндоплазматическом ретикулуме , Irgm1 и Irgm2 локализуются в аппарате Гольджи , [13] и по крайней мере два IRG (Irgb6 и Irgd) преимущественно обнаруживаются в цитозоле . [14] После проникновения в клетку Toxoplasma gondii IRG могут быстро перераспределяться на мембрану паразитофорной вакуоли (PVM) в течение 2–30 минут. [12] Был определен примерный порядок декорирования PVM, начиная с загрузки Irgb6 и Irgb10, за которыми следуют Irga6, Irgd и Irgm2. Также сообщалось о слабой локализации Irgm3 на вакуолях T. gondii в редких случаях. Считается, что активация IRG следует за ГТФ-зависимым циклом олигомеризации IRG-IRG . [15] Считается, что загрузка «пионеров» IRG в вакуоль значительно усиливает привлечение дополнительных IRG кооперативным образом.
Патогены совместно развили уникальные механизмы для вмешательства в различные этапы, ведущие к ассоциации полного набора IRG, необходимого для создания вакуолярного деструктивного комплекса. Один из таких примеров был выявлен путем инфицирования вирулентными и рекомбинантными , авирулентными штаммами T. gondii . Сложный механизм демонстрирует совместное взаимодействие между двумя видами. Недавно было показано, что эффекторная молекула роптрии типа I T. gondii Rop18, серин-треониновая киназа , селективно фосфорилирует и инактивирует «пионеры» IRG, тем самым предотвращая их сборку, активацию и разрушение вакуоли T. gondii внутри моноцитов . [16] [17]
В дополнение к роли IRG в инфекции T. gondii , было также показано, что клиренс Mycobacterium , Mtb, был неблагоприятно затронут у мышей, у которых отсутствовал Irgm1, ключевой отрицательный регуляторный IRG. [10] Предполагается, что механизм клиренса включает липидные взаимодействия, которые помогают нацеливать IRG на Mtb, содержащие фагосомы внутри макрофагов . [18]
Другой пример роли IRG в мышиной модели инфекции демонстрируется дифференциальным набором IRG, которые изменяют исход включений Chlamydia trachomatis , адаптированных к человеку, по сравнению с Chlamydia muridarum , адаптированными к мышам, после проникновения. Включения C. trachomatis привлекают полный репертуар IRG, которые помогают в устранении включений посредством слияния с лизосомами . [ 19] Было обнаружено, что регуляция экспрессии и активности IRG в этой модели зависит как от уровней фосфолипазы C, cPLA2 , так и от восходящей сигнализации IFN. Клетки мыши cPLA2 null при столкновении с C. trachomatis были менее способны устранять патоген по сравнению с клетками с надлежащей экспрессией cPLA2. [20] Модель подчеркивает совместную эволюцию, продемонстрированную эффекторными молекулами C. muridarum, функционирующими для ограничения накопления мышиных IRG на включениях путем модификации Irgb10, тогда как человеческий патоген не способен модифицировать реакцию мышиного IRG. [19] Этот механизм требует дополнительного участия клеточного аппарата аутофагии, что контрастирует с активацией некротического пути при очистке от T. gondii. [17] Уточненный механизм потребует дополнительных исследований для выяснения взаимодействия между аппаратом аутофагии и IRG, участвующими в слиянии бактериальных включений с лизосомой, а также специфических бактериальных эффекторных молекул, используемых для управления скоординированными действиями IRG. [21]
В дополнение к роли Irgm1 в очищении от паразитов, была предложена цитопротекторная роль зрелых CD4 + T-клеток после воздействия IFNy в ответе TH1 . [22] Сообщалось, что у мышей с нулевым Irgm1 развивается панцитопения после заражения как Mycobacterium avium, так и Trypanosoma cruzi . Этот фенотип был обращен вспять при представлении в модели двойного нокаута IFNγ/Irgm1. Эти исследования предоставили доказательства того, что роль IRG может оказаться не только пространственно и временно регулируемой высокоскоординированным образом, но и что они имеют контекстно-специфические вспомогательные роли за пределами традиционного развития и созревания фаголизосом . [22] [23]
У людей есть только три предполагаемых гена IRG, из которых IRGM, как известно, является ортологом мышиного Irgm1. [4] Существует четыре изоформы IRGM (ad). В отличие от мышиных IRG, человеческие изоформы IRGM всегда экспрессируются под элементом человеческого ретровируса ERV9 и не зависят от уровней IFNγ. IRGMb и d имеют предполагаемый мотив G5 (SAK) в их C-концевой хвостовой области, тогда как другие две изоформы не имеют. [24] IRGMd кажется диффузным в цитоплазме и транслоцируется в митохондрии, появляясь в виде точечных точек. Кроме того, было показано, что он связывается с липидом митохондриальной мембраны, кардиолипином, и влияет на изменение морфологии органелл. В целом было показано, что человеческие IRG влияют на ряд процессов, таких как аутофагия , деление митохондрий , изменение потенциала митохондриальной мембраны и гибель клеток .
Было показано, что человеческий IRGM, как и его мышиный аналог, играет роль в аутофагии, механизм которой до конца не изучен. LC3 — это растворимый белок, связанный с микротрубочками, обнаруженный в тканях млекопитающих. Цитоплазматические белки и органеллы поглощаются аутофагосомами, которые преобразуют LC3-I в LC3-II. Присутствие LC3-II служит маркером аутофагии и может быть обнаружено с помощью иммунофлуоресценции или иммуноблоттинга . [25] IRGM помогает преобразовывать LC3-I в LC3-II в макрофагах. [4] IRGM играют двойную роль. При очень низких уровнях экспрессии они служат для защиты от внутриклеточных патогенов, но при чрезмерной экспрессии изоформ a, c и d это приводит к гибели клеток и воспалению.
Исследования показывают, что отсутствие IRGM является фактором риска для болезни Крона и туберкулеза . Люди используют IRGM в качестве защитного механизма против внутриклеточных бактерий Mycobacterium tuberculosis . Было обнаружено, что он важен для созревания фагосом и для сокращения количества внутриклеточных микобактерий с помощью других белков деления митохондрий, таких как DRP1 и FIs1. [4] При определенных условиях деление митохондрий и связанные с ним белки способствуют аутофагии, тогда как слияние митохондрий ингибирует ее. В условиях, вызывающих аутофагию, IRGM также увеличивает выработку ROS ( активных форм кислорода ).
Высокий уровень IRGMd запускает деление митохондрий, приводит к потере потенциала митохондриальной мембраны и вызывает гибель клетки-хозяина. Деление также связано с митохондриальным Bax / Bak- зависимым апоптозом, и IRGMd требует, чтобы эти белки были функциональными. Смерть клеток от IRGM не зависит от аутофагии, но зависит от вышеупомянутых проапоптотических факторов. В результате клеточной смерти, вызванной IRGM, умирающие и некротические клетки выделяют ядерный HMGB1, провоспалительный алармин, участвующий в болезни Крона. [24]