Г418
Г418
Имена
Название ИЮПАК
(1 S ,2 S ,3 R ,4 S ,6 R )-4,6-Диамино-2-гидроксициклогексан-1,3-диил 1-(3-амино-3-дезокси-4- C -метил-β- L -арабинопиранозид) 3-(2-амино-2,7-дидезокси- D - глицеро -α- D - глюко -гептопиранозид)
Систематическое название ИЮПАК
(2 R ,3 S ,4 R ,5 R ,6 S )-5-амино-6-{[(1 R ,2 S ,3 S ,4 R ,6 S )-4,6-диамино-3-{[(2 R ,3 R ,4 R ,5 R )-3,5-дигидрокси-5-метил-4-(метиламино)оксан-2-ил]окси}-2-гидроксициклогексил]окси}-2-[(1 R )-1-гидроксиэтил]оксан-3,4-диол
Другие имена
Генетицин
O -2-амино-2,7-дидезокси- D -глицеро-α- D -глюко-гептопиранозил-(1→4)- O -(3-дезокси-4- C -метил-3-(метиламино)-β- L -арабинопиранозил- (1→6))- D -стрептамин
Идентификаторы
  • 49863-47-0 проверятьИ
  • 108321-42-2 (дисульфатная соль) ☒Н
3D модель ( JSmol )
  • Интерактивное изображение
ChEMBL
  • ChEMBL215226 ☒Н
ChemSpider
  • 21106441 проверятьИ
DrugBank
  • DB04263 проверятьИ
CID PubChem
  • 123865
УНИИ
  • А08Ф5ХТИ6Г проверятьИ
  • DTXSID10198129
  • ИнЧИ=1S/C20H40N4O10/c1-6(25)14-11(27)10(26)9(23)18(32-14)33-15-7(21)4-8(22)16(12( 15)28)34-19-13(29)17(24-3) 20(2,30)5-31-19/h6-19,24-30H,4-5,21-23H2,1-3H3/t6-,7-,8+,9+,10+,11-, 12-,13+,14?,15+,16-,17+,18+,19+,20-/м0/с1 проверятьИ
    Ключ: BRZYSWJRSDMWLG-NQRKCNNJSA-N проверятьИ
  • ИнЧИ=1/C20H40N4O10/c1-6(25)14-11(27)10(26)9(23)18(32-14)33-15-7(21)4-8(22)16(12( 15)28)34-19-13(29)17(24-3)2 0(2,30)5-31-19/h6-19,24-30H,4-5,21-23H2,1-3H3/t6-,7-,8+,9+,10+,11-, 12-,13+,14?,15+,16-,17+,18+,19+,20-/м0/с1
    Ключ: BRZYSWJRSDMWLG-NQRKCNNJBI
  • O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](N)C[C@@H](N)[C@H](O[C@H]1OC[C@](C)(O)[C@H](NC)[C@H]1O)[C@H]2O)OC3[C@@H](O)C
Характеристики
С20Н40Н4О10​​​​​​​
Молярная масса496,558  г·моль −1
50 мг/мл
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа).
☒Н проверить  ( что такое   ?)проверятьИ☒Н
Химическое соединение

G418 ( генетицин ) — аминогликозидный антибиотик , схожий по структуре с гентамицином B1 . Он вырабатывается Micromonospora rhodorangea . [1] G418 блокирует синтез полипептида , ингибируя стадию удлинения как в прокариотических , так и в эукариотических клетках. [1] Устойчивость к G418 обеспечивается геном neo из Tn5, кодирующим аминогликозид 3'-фосфотрансферазу, APT 3' II. [1] G418 является аналогом сульфата неомицина и имеет механизм, аналогичный неомицину . G418 обычно используется в лабораторных исследованиях для отбора генетически модифицированных клеток. [2] Обычно для бактерий и водорослей используются концентрации 5 мкг/мл или менее, для клеток млекопитающих концентрации приблизительно 400 мкг/мл используются для отбора и 200 мкг/мл для поддержания. Однако оптимальная концентрация для отбора резистентных клонов в клетках млекопитающих зависит от используемой клеточной линии , а также от плазмиды, несущей ген резистентности, поэтому следует провести титрование антибиотика, чтобы найти наилучшие условия для каждой экспериментальной системы. Титрование следует проводить с использованием концентраций антибиотика в диапазоне от 100 мкг/мл до 1400 мкг/мл. Отбор резистентных клонов может занять от 1 до 3 недель. [ необходима цитата ]

Профиль примесей G418

G418 производится путем ферментации и изоляции, а штамм Micromonospora rhodorangea, продуцирующий G418 , производит много других гентамицинов, одновременно производя G418. Распространенные примеси G418 включают гентамицины A, C1, C1a, C2, C2a и X2. [3] Качество G418 основано не только на эффективности, но и на селективности, определяемой кривой гибели чувствительных клеток по сравнению с резистентными клетками. Хороший продукт G418 имеет самую низкую LD 50 для чувствительных клеток (таких как NIH 3T3 ) и самую высокую LD 50 (может достигать 5000 мкг/мл) для резистентных клеток (NIH 3T3, трансфицированных резистентными генами). Гентамицины практически не обладают селективностью, за исключением гентамицина X2. [4]

Использование в клеточной биологии

G418 обычно используется в качестве селективного агента в установках клеточной культуры. Исследователи могут связать селективный ген резистентности neoR со своим вектором. Затем, если вектор успешно введен в клетки, клетки могут стать клетками, устойчивыми к G418. После обработки G418 эти векторные (-) клетки погибнут, в то время как векторные (+) клетки выживут. Этот метод может помочь исследователям выбрать векторные (+) клетки. [1] [5]

Механизм действия

G418 Дисульфат и другие аминогликозиды предотвращают синтез белка на ранних стадиях удлинения, пост-инициации, инициации трансляции. Устойчивость к G418 Дисульфату обеспечивается геном устойчивости к неомицину ( neo) из транспозонов Tn5 или Tn601 (903). Клетки, трансфицированные плазмидами устойчивости, содержащими ген neo , могут экспрессировать аминогликозид 3'-фосфотрансферазу (APT 3' I или APT 3' II), которая ковалентно модифицирует G418 в 3-фосфорный G418, который имеет незначительную активность и низкое сродство к прокариотическим и эукариотическим рибосомам. [6]

Ссылки

  1. ^ abcd "Geneticin". Thermo Fisher Scientific . Архивировано из оригинала 2017-08-08 . Получено 2017-08-07 .
  2. ^ "G418". labome.com . Архивировано из оригинала 2009-12-29 . Получено 2010-01-09 .
  3. ^ "Профиль примесей G418". Архивировано из оригинала 2016-03-03 . Получено 2011-10-03 .
  4. ^ "G418 selectivity". Архивировано из оригинала 2016-02-05 . Получено 2011-07-14 .
  5. ^ Харви Лодиш и др. (2013). «Глава 5: Молекулярно-генетические методы». Молекулярная клеточная биология (7-е изд.). Macmillan Higher Education. стр. 171–223. ISBN 978-1-4641-0981-2.
  6. ^ "G418 Дисульфат". TOKU-E . Получено 2024-06-28 .
Взято с "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=G418&oldid=1257361070"