КолЕ1

Плазмида в бактериях

ColE1 — это плазмида , обнаруженная в бактериях . Ее название происходит от того факта, что она несет ген колицина E1 ( ген cea ). Она также кодирует иммунитет от этого продукта с помощью гена imm . Кроме того, плазмида имеет ряд генов мобильности ( mob ). Ее размер и наличие одного сайта распознавания EcoRI заставили ее рассматриваться в качестве кандидата на вектор . ^[1]

Репликация

Репликация ColE1 начинается в точке начала . На 555 п.н. выше этой точки РНК-полимераза инициирует транскрипцию РНКII, которая действует как препраймер и начинает синтез лидерной цепи . Транскрипт сворачивается во вторичную структуру, которая стабилизирует взаимодействие между зарождающейся РНК и ДНК начала. Этот гибрид подвергается атаке РНКазы H , которая расщепляет цепь РНК, обнажая 3'-гидроксильную группу. Это позволяет удлинить лидирующую цепь ДНК-полимеразой I. Синтез отстающей цепи позже инициируется праймазой, кодируемой клеткой-хозяином. Репликация полностью осуществляется белками-хозяевами (РНК-полимеразой, ДНК-полимеразой I и РНКазой H), так что ингибирование трансляции остановит рост клеток, но не репликацию ColE1. Поскольку трансляция белка Rop также будет ингибирована, в этих клетках будет получено большее, чем обычно, число копий.

Контроль количества копий

RNAI является контртранскриптом к участку RNAII и поэтому связывается с его 5'-концом. Это изменяет сворачивание RNAII, так что гибрид ДНК-РНК не стабилизируется и расщепления не происходит. Это гарантирует, что при большом количестве копий репликация замедляется из-за повышенной концентрации RNAI. Rop является вторичным репрессором репликации, он стабилизирует гибрид RNAI-RNAII. Rop может быть особенно важен для предотвращения неконтролируемой репликации при низких скоростях роста.

ColE1 имеет номер копии 25-30 в соответствии с его оригинальной публикацией. ^[2]

Ссылки

^ Хершфилд, В. и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярное транспортное средство для клонирования и амплификации ДНК». Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59 . Bibcode : 1974PNAS...71.3455H. doi : 10.1073/pnas.71.9.3455 . PMC 433792. PMID 4610576 .
^ Хершфилд, В. и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярное транспортное средство для клонирования и амплификации ДНК». Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59 . Bibcode : 1974PNAS...71.3455H. doi : 10.1073/pnas.71.9.3455 . PMC 433792. PMID 4610576 .

[1] Хершфилд, В. и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярное транспортное средство для клонирования и амплификации ДНК». Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59 . Bibcode : 1974PNAS...71.3455H. doi : 10.1073/pnas.71.9.3455 . PMC 433792. PMID 4610576 .

[2] Хершфилд, В. и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярное транспортное средство для клонирования и амплификации ДНК». Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59 . Bibcode : 1974PNAS...71.3455H. doi : 10.1073/pnas.71.9.3455 . PMC 433792. PMID 4610576 .