Желтый флуоресцентный белок
Желтый флуоресцентный белок ( YFP ) — это генетический мутант зеленого флуоресцентного белка (GFP), первоначально полученного из медузы Aequorea victoria . [1] Его пик возбуждения составляет 513 нм, а пик испускания — 527 нм. [2] Как и родительский GFP, YFP является полезным инструментом в клеточной и молекулярной биологии , поскольку пики возбуждения и испускания YFP отличаются от GFP, что позволяет изучать несколько процессов/белков в одном эксперименте.
Три улучшенных версии YFP — это Citrine, Venus и Ypet. Они имеют пониженную чувствительность к хлориду, более быстрое созревание и повышенную яркость (определяемую как произведение коэффициента экстинкции и квантового выхода ). Обычно YFP служит акцептором для генетически кодируемых сенсоров FRET , из которых наиболее вероятным донором FP является мономерный голубой флуоресцентный белок (mCFP). Красное смещение относительно GFP вызвано взаимодействием стекирования Pi-Pi в результате замены T203Y, введенной мутацией, что существенно увеличивает поляризуемость локальной среды хромофора , а также обеспечивает дополнительную электронную плотность в хромофоре.
«Venus» содержит новую аминокислотную замену –F46L–, которая ускоряет окисление хромофора при 37°C, скорость ограничивающего этапа созревания. Белок имеет другие замены (F64L/ M153T/ V163A/ S175G), что позволяет Venus хорошо складываться и дает ему относительную толерантность к ацидозу и Cl − . [3]
Эволюция YFP из GFP
Для создания мутанта YFP потребовалось четыре мутации белка из дикого типа GFP, обнаруженного в медузе Aequorea Victoria. Самой важной мутацией была замена треонина на тирозин в позиции остатка 203 [1] (замена обозначается как T203Y, где T и Y представляют собой однобуквенный код для аминокислот треонина и тирозина соответственно).
Смотрите также
Ссылки
- ^ ab Ormö, Mats; Cubitt, Andrew B.; Kallio, Karen; Gross, Larry A.; Tsien, Roger Y.; Remington, S. James (1996-09-06). "Кристаллическая структура зеленого флуоресцентного белка Aequorea victoria". Science . 273 (5280): 1392– 1395. Bibcode :1996Sci...273.1392O. doi :10.1126/science.273.5280.1392. ISSN 0036-8075. PMID 8703075.
- ^ Ламберт, Талли. "EYFP в FPbase". FPbase . Получено 22.02.2021 .
- ^ Нагаи, Т.; Ибата, К.; Парк, ЭС; Кубота, М.; Микошиба, К.; Мияваки, А. (2002). «Вариант желтого флуоресцентного белка с быстрым и эффективным созреванием для клеточно-биологических приложений». Nature Biotechnology . 20 (1): 87– 90. doi :10.1038/nbt0102-87. PMID 11753368.
Внешние ссылки
- Введение во флуоресцентные белки
- EYFP на базе FP
- Мияваки, Ацуши; Ллопис, Хуан; Хейм, Роджер; Маккаффери, Дж. Майкл; Адамс, Джозеф А.; Икура, Мицухико; Циен, Роджер Й. (1997). "Флуоресцентные индикаторы для Ca2+ на основе зеленых флуоресцентных белков и кальмодулина". Nature . 388 (6645): 882– 7. doi : 10.1038/42264 . PMID 9278050.
