УРА3

URA3 — это ген на хромосоме V в Saccharomyces cerevisiae (дрожжи). Его систематическое название — YEL021W . URA3 часто используется в исследованиях дрожжей как «маркерный ген», то есть ген для маркировки хромосом или плазмид . URA3 кодирует оротидин-5'-фосфатдекарбоксилазу (ODCase) , которая является ферментом , катализирующим одну реакцию в синтезе пиримидиновых рибонуклеотидов (компонента РНК ). ^[1]

Потеря активности ODCase приводит к отсутствию роста клеток, если в среду не добавлены урацил или уридин . Присутствие гена URA3 в дрожжах восстанавливает активность ODCase, способствуя росту на средах, не дополненных урацилом или уридином, тем самым позволяя проводить селекцию дрожжей, несущих ген. Напротив, если в среду добавить 5-FOA (5-фтороротову кислоту) , активная ODCase преобразует 5-FOA в токсичное соединение ( ингибитор самоубийства ) 5-фторурацил, вызывая гибель клеток, что позволяет проводить селекцию против дрожжей, несущих ген.

Поскольку URA3 допускает как положительный, так и отрицательный отбор, он был разработан как генетический маркер для трансформаций ДНК и других генетических методов в бактериях и многих видах грибов. Это один из важнейших генетических маркеров в генетической модификации дрожжей . Хотя URA3 является мощным селективным маркером, у него высокий фон. Этот фон обусловлен тем, что клетки, которые подхватывают мутации в URA3, могут также расти на 5-FOA. Колонии следует проверить вторым анализом, таким как ПЦР, чтобы подтвердить, что был создан желаемый штамм.

• "Ген URA3". База данных S. cerevisiae . 2018.