Фрагмент ограничения
Эта статья нуждается в дополнительных цитатах для проверки . ( январь 2020 г. ) |
Фрагмент рестрикции — это фрагмент ДНК, полученный в результате разрезания цепи ДНК рестриктазой ( эндонуклеазой рестрикции), процесс называется рестрикцией. [1] Каждый рестриктаз является высокоспецифичным, распознающим определенную короткую последовательность ДНК или сайт рестрикции и разрезающим обе цепи ДНК в определенных точках внутри этого сайта. Большинство сайтов рестрикции являются палиндромными (последовательность нуклеотидов одинакова на обеих цепях при чтении в направлении от 5' до 3' каждой цепи) и имеют длину от четырех до восьми нуклеотидов . Многие разрезы производятся одним рестриктазой из-за случайного повторения этих последовательностей в длинной молекуле ДНК, что дает набор фрагментов рестрикции. Конкретная молекула ДНК всегда будет давать один и тот же набор фрагментов рестрикции при воздействии одного и того же рестриктазы. Фрагменты рестрикции можно анализировать с помощью таких методов, как гель-электрофорез , или использовать в технологии рекомбинантной ДНК . [2]
Приложения
В технологии рекомбинантной ДНК используются специфические эндонуклеазы рестрикции, которые изолируют определенный ген и расщепляют остовы сахарофосфата в разных точках (сохраняя симметрию), так что двухцепочечные фрагменты рестрикции имеют одноцепочечные концы. Эти короткие расширения, называемые липкими концами , могут образовывать водородно-связанные пары оснований с комплементарными липкими концами на любой другой ДНК, разрезаемой тем же ферментом (например, бактериальной плазмиде).
В электрофорезе в агарозном геле фрагменты рестрикции дают полосовой рисунок, характерный для исходной молекулы ДНК и используемого рестриктазы, например, относительно небольшие молекулы ДНК вирусов и плазмид можно идентифицировать просто по их рисункам фрагментов рестрикции. Если различия нуклеотидов двух разных аллелей происходят в сайте рестрикции конкретного рестриктазы, переваривание сегментов ДНК от людей с разными аллелями для этого конкретного гена этим ферментом приведет к получению разных фрагментов, и каждый из них даст разные рисунки полос в гель-электрофорезе.
Ссылки
- ^ Робертс, Р. Дж. (2005). «Как рестрикционные ферменты стали рабочими лошадками молекулярной биологии». Труды Национальной академии наук . 102 (17): 5905– 5908. Bibcode : 2005PNAS..102.5905R. doi : 10.1073/pnas.0500923102 . PMC 1087929. PMID 15840723 .
- ^ Кэмпбелл, Нил А .; Джейн Б. Рис (2005). Биология (седьмое изд.). Бенджамин Камминс. ISBN 0-8053-7171-0.
 | Эта статья по генетике — заглушка . Вы можете помочь Википедии, расширив ее. |
