Кроличья гибридома
Группа ячеек

Гибридома кролика — это гибридная клеточная линия , образованная путем слияния продуцирующей антитела В-клетки кролика с раковой В-клеткой ( миеломной ).

История

Иммунная система кролика была задокументирована как средство для разработки антител с более высоким сродством и более разнообразным распознаванием многих молекул, включая фосфопептиды, углеводы и иммуногены, которые в противном случае не были бы иммуногенными у мышей. [1] Однако до недавнего времени тип антител, доступных у кролика, был ограничен поликлональными антителами . Было предпринято несколько попыток создать кроличьи моноклональные антитела после разработки технологии мышиных гибридом в 1970-х годах. [2] Были проведены исследования гетерогибридом мыши и кролика для создания кроличьих моноклональных антител. [1] [3] Однако эти гетерогибридомы в конечном итоге было трудно клонировать, а клоны, как правило, были нестабильны и не секретировали антитела в течение длительного периода времени.

Первоначальный партнер по слиянию

В 1995 году Кэтрин Найт и ее коллеги из Чикагского университета Лойолы преуспели в создании двойного трансгенного кролика, сверхэкспрессирующего онкогены v-abl и c-myc под контролем усилителей тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина. У кролика образовалась опухоль, похожая на миелому, что позволило выделить линию клеток плазмоцитомы, названную 240E-1. Слияние клеток 240E-1 с лимфоцитами кролика дало гибридомы, которые секретировали моноклональные антитела кролика постоянным образом. [4] Однако, как и ранние линии миеломы мышей, разработанные в 1970-х годах, стабильность была проблемой. Ряд лабораторий, которые получили линию клеток 240E-1 из лаборатории доктора Найта, сообщили о проблемах со стабильностью слитой линии клеток 240E-1. [5]

Улучшенный партнер по слиянию

В 1996 году Вэйминь Чжу и Роберт Питела из Калифорнийского университета в Сан-Франциско (UCSF) получили 240E-1 из лаборатории доктора Найта и попытались разработать улучшенную гибридому кролика. [4] Улучшения характеристик 240E-1 были достигнуты путем повторного субклонирования, отбора на высокую эффективность слияния, надежный рост и морфологические характеристики, такие как яркий внешний вид под фазово-контрастным микроскопом . Выбранные субклоны были дополнительно проверены на их способность производить стабильную гибридому и секрецию моноклональных антител. После нескольких раундов процессов субклонирования и отбора была идентифицирована новая линия клеток, названная 240E-W, которая проявила лучшую эффективность слияния и стабильность. С тех пор линия клеток 240E-W была дополнительно разработана и оптимизирована для производства моноклональных антител кролика для исследовательских и коммерческих целей.

Процесс

Процесс формирования гибридомы у кролика сначала подразумевает получение В-клеток от иммунизированного кролика. Существует множество протоколов иммунизации для кроликов, в частности, для генерации поликлональных антител. [6] [7] [8] После иммунизации В-клетки сливаются с клеточной линией-кандидатом кролика-партнера для слияния, образуя гибридомы. Полученные антитела из гибридом проверяются на наличие антигена, который соответствует критериям интереса, с помощью диагностических тестов, таких как ИФА , вестерн-блот , иммуногистохимия и FACS. Полученные гибридомы могут быть субклонированы для обеспечения моноклональных характеристик.

Гуманизация кроличьих антител

Митчелл Хо и Айра Пастан из Национального института рака (Бетесда, США) выделили группу моноклональных антител кролика (например, YP218, YP223), которые распознают редкие эпитопы мезотелина , включая слабоиммуногенные сайты вблизи С-конца, для терапии рака. [9] Лаборатория доктора Хо проанализировала сложные структуры антител кролика с их антигенами из Банка данных белков и идентифицировала остатки, контактирующие с антигеном, на Fv кролика в пределах расстояния 6 ангстрем до его антигена. [10] Они назвали «HV4» и «LV4», петли некомплементарно-определяющей области (CDR), которые структурно близки к антигену и расположены в каркасе 3 тяжелой цепи и легкой цепи кролика соответственно. Основываясь на вычислительном структурном моделировании, Хо и Чжан разработали стратегию гуманизации путем прививки объединенных CDR Кабата/IMGT/Паратома в каркасную последовательность человеческой зародышевой линии. Иммунотоксины, состоящие из гуманизированных кроличьих Fv (например, hYP218), слитых с клинически используемым токсином, показали более сильную цитотоксичность против опухолевых клеток, чем иммунотоксины, полученные из их исходных кроличьих Fv. CAR T-клетки на основе антитела hYP218 также показывают эффективное ингибирование роста опухоли у мышей. [11] Метод (т. е. прививка комбинированных кроличьих CDR Kabat/IMGT/Paratome к стабильному человеческому зародышевому каркасу) был предложен в качестве общего подхода к гуманизации кроличьих антител. [10]

Ссылки

  1. ^ ab Raybould TJ, Takahashi M (июнь 1988). «Производство стабильных гибридом кролика-мыши, которые секретируют кроличьи моноклональные антитела определенной специфичности». Science . 240 (4860): 1788– 90. Bibcode :1988Sci...240.1788R. doi :10.1126/science.3289119. PMID  3289119.
  2. ^ Collins JJ, Black PH, Strosberg AD, Haber E, Bloch KJ (февраль 1974 г.). «Трансформация клеток селезенки гипериммунного кролика вирусом обезьян 40: доказательства синтеза иммуноглобулина трансформированными клетками». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 71 (2): 260– 2. Bibcode : 1974PNAS...71..260C. doi : 10.1073 /pnas.71.2.260 . JSTOR  62751. PMC 387981. PMID  4150020. 
  3. ^ Kuo MC, Sogn JA, Max EE, Kindt TJ (апрель 1985 г.). «Кролико-мышиные гибридомы, секретирующие интактный кроличий иммуноглобулин». Молекулярная иммунология . 22 (4): 351– 9. doi :10.1016/0161-5890(85)90119-1. PMID  4033662.
  4. ^ ab Spieker-Polet H, Sethupathi P, Yam PC, Knight KL (сентябрь 1995 г.). «Кроличьи моноклональные антитела: создание партнера по слиянию для получения гибридом кролик-кролик». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 92 (20): 9348– 52. Bibcode : 1995PNAS...92.9348S. doi : 10.1073/pnas.92.20.9348 . PMC 40982. PMID  7568130 . 
  5. ^ Liguori MJ, Hoff-Velk JA, Ostrow DH (июнь 2001 г.). «Рекомбинантный человеческий интерлейкин-6 усиливает секрецию иммуноглобулина гибридомы кролик-кролик». Hybridoma . 20 (3): 189– 98. doi :10.1089/027245701750293529. PMID  11461668.
  6. ^ Howard GC, Kaser MR, ред. (2007). Создание и использование антител: практическое руководство . CRC Press. ISBN 9780849335280.
  7. ^ Harlow E, Lane D (1988). Антитела: лабораторное руководство . Лаборатория Cold Spring Harbor. ISBN 978-1-936113-81-1.
  8. ^ Coligan JE, Kruisbeek AM, et al., ред. (1994). Современные протоколы в иммунологии . Greene and Wiley.
  9. ^ Zhang YF, Phung Y, Gao W, Kawa S, Hassan R, Pastan I, Ho M (май 2015 г.). «Новые высокоаффинные моноклональные антитела распознают неперекрывающиеся эпитопы мезотелина для мониторинга и лечения мезотелиомы». Scientific Reports . 5 : 9928. Bibcode :2015NatSR...5E9928Z. doi :10.1038/srep09928. PMC 4440525 . PMID  25996440.  Материал скопирован из этого источника, который доступен по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International.
  10. ^ ab Zhang YF, Ho M (апрель 2017 г.). «Гуманизация моноклональных антител кролика посредством прививки комбинированных областей, определяющих комплементарность Kabat/IMGT/Paratome: обоснование и примеры». mAbs . 9 (3): 419– 429. doi :10.1080/19420862.2017.1289302. PMC 5384799 . PMID  28165915.  Общественное достояниеВ данной статье использован текст из этого источника, находящегося в общественном достоянии .
  11. ^ Чжан З, Цзян Д, Ян Х, Хэ З, Лю Х, Цинь В и др. (июнь 2019 г.). «Модифицированные CAR T-клетки, нацеленные на мембранно-проксимальный эпитоп мезотелина, усиливают противоопухолевую функцию против крупных солидных опухолей». Cell Death & Disease . 10 (7): 476. doi :10.1038/s41419-019-1711-1. PMC 6572851 . PMID  31209210. 
  • Spieker-Polet H, Sethupathi P, Yam PC, Knight KL (сентябрь 1995 г.). «Кроличьи моноклональные антитела: создание партнера по слиянию для получения гибридом кролик-кролик». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 92 (20): 9348– 52. Bibcode : 1995PNAS...92.9348S. doi : 10.1073/pnas.92.20.9348 . JSTOR  2368468. PMC  40982. PMID  7568130 .
  • Notenboom RH, Chou CT, Good PW, Dubiski S, Cinader B, Köhler G (октябрь 1980 г.). «Выделение и характеристика гибридомы мыши и кролика». Журнал иммуногенетики . 7 (5): 359–68 . doi :10.1111/j.1744-313X.1980.tb00729.x. PMID  7430676. S2CID  39872636.
  • Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F и др. (август 2005 г.). «Кроличьи моноклональные антитела: сравнительное исследование новой категории иммунореагентов и соответствующих мышиных моноклональных антител». American Journal of Clinical Pathology . 124 (2): 295– 302. doi : 10.1309/NR8H-N08G-DPVE-MU08 . PMID  16040303.
  • Целлозавр запись для 240E-1
  • Целлозавр запись для 240E-W
Взято с "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Rabbit_hybridoma&oldid=1216025953"