Анализ фосфоаминокислот

Анализ фосфоаминокислот (ФАА) — это экспериментальный метод, используемый в молекулярной биологии для определения того, какая аминокислота или кислоты фосфорилируются в белке .

Сначала белок фосфорилируется с использованием ³² P -меченого АТФ , обычно с помощью анализа киназы in vitro . Затем большинство аминокислот в белке гидролизуются, обычно с использованием сильной кислоты, такой как соляная кислота . Затем эти аминокислоты разделяются с помощью двумерной тонкослойной хроматографии вместе со стандартами аминокислот для трех аминокислот, которые фосфорилируются у эукариот : серина , треонина и тирозина . Эти стандарты аминокислот можно визуализировать на субстрате ТСХ путем воздействия нингидрина , который окрашивает аминокислоты в видимый фиолетовый цвет при нагревании до ~100 °C. Радиоактивные аминокислоты можно обнаружить с помощью авторадиографии, и наложение двух изображений покажет, какие аминокислоты фосфорилируются.

• Ротберг, П. Г., Харрис, Т. Дж. Р., Номото, А. и Виммер, Э. (1978) O4-(5'-уридилил)тирозин — это связь между геном-связанным белком и РНК полиовируса. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75 , 4868-4872.
• Экхарт, В., Хатчинсон, МА, и Хантер, Т. (1979) Активность фосфорилирования тирозина в иммунопреципитатах антигена полиомы Т. Cell 18 , 925-933.