Pfu ДНК-полимераза

Искать
Структуры	Швейцарская модель
Домены	ИнтерПро

Pfu ДНК-полимераза
Pfu ДНК-полимераза
Идентификаторы
Организм	Пирококкус фуриосус
Символ	пол
ПДБ	4ahc
UniProt	Р61875
Структуры
Искать
Структуры	Швейцарская модель
Домены	ИнтерПро

Фермент

Pfu ДНК-полимераза — это фермент, обнаруженный в гипертермофильной архее Pyrococcus furiosus , где он функционирует для копирования ДНК организмаво время деления клеток ( термостабильная ДНК-полимераза ). В лабораторных условиях Pfu используется для амплификации ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), где фермент выполняет центральную функцию копирования новой цепи ДНК на каждом этапе удлинения.

Это ДНК-полимераза семейства B. Она имеет РНКазу H -подобный 3'-5' экзонуклеазный домен, типичный для полимераз семейства B, таких как ДНК-полимераза II . ^[1]

Корректурная способностьПфуполимераза

Pfu ДНК-полимераза обладает превосходной термостабильностью и корректирующими свойствами по сравнению с Taq ДНК-полимеразой . В отличие от Taq ДНК-полимеразы, Pfu ДНК -полимераза обладает 3'-5' экзонуклеазной корректирующей активностью, что означает, что по мере сборки ДНК от 5' конца к 3' концу экзонуклеазная активность немедленно удаляет нуклеотиды, неправильно включенные на 3' конце растущей цепи ДНК. Следовательно, фрагменты ПЦР, полученные с помощью Pfu ДНК-полимеразы, будут иметь меньше ошибок, чем вставки ПЦР, полученные с помощью Taq .

Коммерчески доступный Pfu обычно приводит к частоте ошибок 1 на 1,3 миллиона пар оснований и может дать 2,6% мутированных продуктов при амплификации фрагментов размером 1 кб с использованием ПЦР. Однако Pfu медленнее и обычно требует 1–2 минуты на цикл для амплификации 1 кб ДНК при 72 °C. Использование ДНК-полимеразы Pfu в реакциях ПЦР также приводит к продуктам ПЦР с тупыми концами. ^[2]

Таким образом, ДНК-полимераза Pfu превосходит ДНК-полимеразу Taq для методов, требующих высокоточного синтеза ДНК, но может также использоваться в сочетании с полимеразой Taq для получения точности Pfu со скоростью активности полимеразы Taq . ^[3]

История

Ученые под руководством Эрика Матура из биотехнологической компании Stratagene, расположенной в Ла-Хойе, Калифорния , в 1991 году открыли ДНК-полимеразу Pfu, которая демонстрирует значительно более высокую точность репликации, чем ДНК-полимераза Taq. ^[4] В 1996 году они получили патенты на Pfu с дефицитом экзонуклеазы и на полную Pfu . ^[5]

Также использовались другие полимеразы из штаммов Pyrococcus, такие как «Deep Vent» ( Q51334 ) из штамма GB-D и ДНК-полимераза Pwo . ^[3]

Ссылки

^ InterPro белковый вид: P61875
^ Agilent Technologies. «Руководство по эксплуатации ДНК-полимеразы PfuTurbo № 600250» (PDF) .
^ ab van Pelt-Verkuil E, van Belkum A, Hays JP (2008). "Taq и другие термостабильные ДНК-полимеразы". Принципы и технические аспекты ПЦР-амплификации . стр. 103–18 . doi :10.1007/978-1-4020-6241-4_7. ISBN 978-1-4020-6240-7.
^ Lundberg KS, Shoemaker DD, Adams MW, Short JM, Sorge JA, Mathur EJ (декабрь 1991 г.). "Высокоточная амплификация с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, выделенной из Pyrococcus furiosus". Gene . 108 (1): 1– 6. doi :10.1016/0378-1119(91)90480-y. PMID 1761218.
^ Патент США 5,489,523 , патент США 5,545,552

Внешние ссылки

Патенты Pfu в США от Stratagene
Патент 5,489,523
Патент 5,545,552

[1] InterPro белковый вид: P61875

[2] Agilent Technologies. «Руководство по эксплуатации ДНК-полимеразы PfuTurbo № 600250» (PDF) .

[Pelt-Verk-3] van Pelt-Verkuil E, van Belkum A, Hays JP (2008). "Taq и другие термостабильные ДНК-полимеразы". Принципы и технические аспекты ПЦР-амплификации . стр. 103–18 . doi :10.1007/978-1-4020-6241-4_7. ISBN 978-1-4020-6240-7.

[pmid1761218-4] Lundberg KS, Shoemaker DD, Adams MW, Short JM, Sorge JA, Mathur EJ (декабрь 1991 г.). "Высокоточная амплификация с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, выделенной из Pyrococcus furiosus". Gene . 108 (1): 1– 6. doi :10.1016/0378-1119(91)90480-y. PMID 1761218.

[5] Патент США 5,489,523 , патент США 5,545,552