Двойная иммунодиффузия Оухтерлони
Биомедицинская техника
Рисунок двойной иммунодиффузионной пластины Оухтерлони после иммунодиффузии. В ней количественно определяется титр антигена. Центральная лунка содержит антитело, а окружающие лунки имеют уменьшающуюся концентрацию соответствующего антигена.
Модели Оухтерлони, не показывающие идентичности между верхними точками
Модели Оухтерлони, показывающие полную идентичность между верхними точками
Модели Оухтерлони, показывающие частичную идентичность между верхними точками

Двойная иммунодиффузия Оухтерлони (также известная как пассивная двойная иммунодиффузия ) — это иммунологический метод, используемый для обнаружения, идентификации и количественной оценки антител и антигенов , таких как иммуноглобулины и извлекаемые ядерные антигены . Метод назван в честь Örjan Ouchterlony , шведского врача, который разработал тест в 1948 году для оценки продукции дифтерийных токсинов из изолированных бактерий. [1]

Процедура

Гелевая пластина разрезается для формирования ряда отверстий («лунок») в агаре или агарозном геле. Экстракт образца, представляющий интерес (например, человеческие клетки, собранные из ткани миндалин), помещается в одну лунку, сыворотка или очищенные антитела помещаются в другую лунку, и пластина оставляется на 48 часов для проявления. В течение этого времени антигены в экстракте образца и антитела диффундируют из своих соответствующих лунок. Там, где встречаются два фронта диффузии, если какие-либо антитела распознают какой-либо из антигенов, они связываются с антигенами и образуют иммунный комплекс . Иммунный комплекс осаждается в геле, образуя тонкую белую линию (линию преципитации), которая является визуальным признаком распознавания антигена. [ необходима цитата ] [2] [3]

Метод может проводиться параллельно с несколькими лунками, заполненными различными смесями антигенов, и несколькими лунками с различными антителами или смесями антител, и реактивность антиген-антитело может быть замечена путем наблюдения за тем, между какими лунками наблюдается осадок. При использовании более чем одной лунки существует множество возможных результатов, основанных на реактивности выбранных антигена и антитела. Зона линий эквивалентности может давать полную идентичность (т. е. непрерывную линию), частичную идентичность (т. е. непрерывную линию с отрогом на одном конце) или неидентичность (т. е. две линии полностью пересекаются). [ необходима цитата ]

Чувствительность анализа можно повысить, используя краситель, например, Кумасси бриллиантовый синий . Это достигается путем повторного окрашивания и обесцвечивания анализа до тех пор, пока линии преципитации не станут максимально заметными. [1]

Теория

Преципитация происходит с большинством антигенов, поскольку антиген является многовалентным (т. е. имеет несколько антигенных детерминант на молекулу, с которыми могут связываться антитела). Антитела имеют по крайней мере два антигенсвязывающих участка (а в случае иммуноглобулина M существует мультимерный комплекс с 10 антигенсвязывающими участками), таким образом, образуются большие агрегаты или гелеобразные решетки антигена и антитела. Экспериментально к постоянному количеству антитела в растворе добавляется все большее количество антигена. Первоначально при низкой концентрации антигена все антитело содержится в преципитате. Это называется зоной избытка антител (т. е. феноменом прозоны). По мере добавления большего количества антигена количество преципитированного белка увеличивается до тех пор, пока молекулы антигена/антитела не будут находиться в оптимальном соотношении. Это известно как зона эквивалентности или точка эквивалентности. Когда количество антигена в растворе превышает количество антитела, количество преципитата уменьшается. Это известно как зона избытка антигена.

Ссылки

  1. ^ ab Hornbeck, Peter (февраль 2017 г.). "Анализ двойной иммунодиффузии для обнаружения специфических антител (Оухтерлони)". Current Protocols in Immunology . 116 (1): 2.3.1–2.3.4. doi :10.1002/cpim.18. PMID  28150863. S2CID  35908711.
  2. ^ Мотика, Эдвард Дж. (2015). Историческая перспектива доказательной иммунологии. Elsevier. стр. 360. ISBN 978-0-12-398381-7.
  3. ^ Пол, Уильям Э., ред. (2008). «Иммунодиффузия и метод Оухтерлони». Фундаментальная иммунология (6-е изд.). Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. стр. 176–177. ISBN 9780781765190.стр. 176 стр. 177
  • Бейли, Грэм С. (1996). "135: Двойная иммунодиффузия Оухтерлони". В Уокер, Джон М. (ред.). Справочник по белковым протоколам . Справочники по протоколам Springer. Том VII: Иммунохимические методы. Тотова, Нью-Джерси : Humana Press . стр. 749–752. doi :10.1007/978-1-60327-259-9_135. ISBN 978-0-89603-338-2.
  • Оухтерлони, Орджан (1948). «Метод in vitro для тестирования токсинообразующей способности дифтерийных бактерий». APMIS . 25 (1–2): 186–191. doi :10.1111/j.1699-0463.1948.tb00655.x. PMID  18887479.
  • Оухтерлони, Орджан (1949). «Реакции антиген-антитело в гелях». APMIS . 26 (4): 507–515. doi :10.1111/j.1699-0463.1949.tb00751.x. PMID  18143039.
  • Оухтерлони, О. (1958). «Методы диффузии в геле для иммунологического анализа». Progress in Allergy . 5 : 1–78. PMID  13578996.
  • Оухтерлони, О. (1962). «Методы диффузии в геле для иммунологического анализа. II». Progress in Allergy . 6 : 30–154. doi :10.1159/000313795. PMID  14482809.
  • Ouchterlony, O.; Nilsson, LA (1986). Weir, Daniel Mackay (ред.). Handbook of Experimental Immunology. Том 1. Иммунохимия (4-е изд.). Оксфорд , Англия : Blackwell Scientific . С. 32.1–32.50. ISBN 9780632014996. Получено 23.11.2012 . в Google Книгах
  • "Анализ Оухтерлони" (PDF) . Медицинская иммунология 544 . Калифорнийский университет, Медицинский колледж Ирвайна . Осень 2011 г. Архивировано из оригинала (PDF) 2012-02-07 . Получено 2012-11-23 .
  • "Двойная диффузия Оухтерлони - Модели: Теория". Value @ Amrita . Индия: Университет Амриты Вишвы Видьяпитам . 2012. Архивировано из оригинала 13.11.2012 . Получено 24.12.2012 .
  • ["Ouchterlony Double Diffusion - Patterns: Procedure"]. Value @ Amrita] . Индия: Университет Амрита Вишва Видьяпитам . 2012. Архивировано из оригинала 14.01.2017 . Получено 24.12.2012 .
  • "Двойная диффузия Оухтерлони - Титрование: Теория". Значение @ Amrita . Индия: Университет Амрита Вишва Видьяпитхам . 2012. Архивировано из оригинала 2012-11-13 . Получено 2012-11-23 .
  • "Двойная диффузия Оухтерлони - Титрование: Процедура". Значение @ Amrita . Индия: Университет Амрита Вишва Видьяпитхам . 2012. Архивировано из оригинала 2017-03-16 . Получено 2012-12-24 .
  • "BSCI423: Lab 5. Precipitation". Колледж компьютерных, математических и естественных наук, Мэрилендский университет, Колледж-Парк . Архивировано из оригинала 2012-02-05 . Получено 2012-11-23 .
  • Симулятор Архивировано 22.05.2007 в Wayback Machine в Калифорнийском университете в Ирвайне
  • "Двойная иммунодиффузия Оухтерлони" (фотография) . Получено 15.05.2017 .[ постоянная неработающая ссылка ] Фотография пластины двойной иммунодиффузии Оухтерлони с неокрашенными линиями преципитации полной идентичности и неидентичности.
  • "Diffusion Patterns". Принципы и применение иммунодиффузии . Архивировано из оригинала 2019-12-11 . Получено 2017-05-19 .Фотографии иммунодиффузионных картин Оухтерлони, демонстрирующие окрашенные линии преципитации полной идентичности, частичной идентичности и неидентичности.
  • "Оухтерлони-анализ". YouTube . Bio-Rad Laboratories. 16 октября 2012 г.
Взято с "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Ouchterlony_double_immunodiffusion&oldid=1222886110"