Белок гриппа NS1 (NS1) — это вирусный неструктурный белок, кодируемый сегментами гена NS вирусов гриппа типа A , B и C. Этот сегмент также кодирует ядерный экспортный белок (NEP), ранее известный как белок NS2, который опосредует экспорт комплексов рибонуклеопротеина (РНП) вируса гриппа из ядра в цитоплазму, где они собираются. [1] [2]
NS1 вируса гриппа А — это белок массой 26 000 дальтон. Он предотвращает полиаденилирование клеточных мРНК , чтобы обойти противовирусные реакции хозяина, например, созревание и трансляцию мРНК интерферона. NS1 также может ингибировать сплайсинг пре-мРНК , связываясь с областью стебель-выпуклость в малой ядерной РНК U6 ( мяРНК ). [3] Кроме того, NS1, вероятно, способен подавлять реакцию интерферона в инфицированной вирусом клетке, что приводит к ненарушенной продукции вируса. [4]
NS1 также связывает dsRNA . Анализы связывания с мутантами белка NS1 установили, что РНК-связывающий домен белка NS1 необходим для связывания с dsRNA, а также для связывания с polyA и U6 snRNA. Кроме того, dsRNA конкурировала с U6 snRNA за связывание с белком NS1, результат, согласующийся с тем, что обе РНК разделяют один и тот же сайт связывания на белке. В результате связывания с dsRNA белок NS1 блокирует активацию протеинкиназы, активируемой dsRNA ( PKR ) in vitro. Эта киназа фосфорилирует альфа-субъединицу эукариотического фактора инициации трансляции 2 (elF-2 alpha), что приводит к снижению скорости инициации трансляции . [ 3] В отсутствие NS1 этот путь ингибируется во время противовирусного ответа, чтобы остановить всю трансляцию белка, тем самым останавливая синтез вирусных белков; Однако белок NS1 вируса гриппа представляет собой агент, который обходит защитные механизмы хозяина, позволяя происходить транскрипции вирусных генов.
Белок NS1 можно разделить на N-концевой (РНК-связывающий) домен и C-концевой (эффекторный домен). РНК-связывающий домен способен нацеливаться на RIG-I и, следовательно, предотвращать активацию индукции ответов интерферона . В эффекторном домене он взаимодействует и ингибирует фактор специфичности расщепления и полиаденилирования (CPSF30). CPSF30 является частью пути процессинга клеточных мРНК, и его ингибирование приводит к неспособности клеточной мРНК экспортироваться за пределы ядра для трансляции, тем самым препятствуя способности клетки-хозяина продуцировать гены, стимулируемые интерфероном . [5]
Белок NS1 высокопатогенных вирусов птиц H5N1 , циркулирующих среди домашних и водоплавающих птиц в Юго-Восточной Азии, в настоящее время считается ответственным за повышенную вирулентность штамма. H5N1 NS1 характеризуется заменой одной аминокислоты в позиции 92. Изменив аминокислоту с глутаминовой кислоты на аспарагиновую кислоту, исследователи смогли аннулировать эффект H5N1 NS1. Это изменение одной аминокислоты в гене NS1 значительно увеличило патогенность вируса гриппа H5N1. [6] Однако влияние остатка 92 на функцию H5N1 NS1 представляется сомнительным, как отмечают редакторы Nature Medicine:
В вышеуказанной статье первоначально сообщалось, что вирусы H5N1 устойчивы к интерферону в клеточной линии SJPL. [6] Редакторы хотят предупредить наших читателей о трех фактах, которые могут повлиять на этот вывод. Во-первых, Нгунджири и др. [7] недавно обнаружили, что аликвоты клеточной линии SJPL, полученные из Американской коллекции типовых культур, были сильно загрязнены микоплазмой. Хотя статус микоплазмы в клетках, использованных в оригинальной статье, неизвестен, нельзя исключить, что они были загрязнены. Во-вторых, изначально сообщалось, что клетки SJPL имеют свиное происхождение, но недавний анализ [8] показал, что они имеют обезьянье происхождение. В-третьих, Нгунджири и др. [7] обнаружили, что вирусы H5N1 чувствительны к интерферонам во всех протестированных клеточных линиях от нескольких видов. [9]
Тот факт, что NS1 участвует в патогенности вирусов гриппа А, делает его хорошей мишенью для ослабления этих вирусов. Несколько исследований показали, что вирусы гриппа с частичными делециями в белках NS1 ослаблены и не вызывают заболевания, но вызывают защитный иммунный ответ у разных видов, включая мышей, [10] [11] свиней, [12] [13] лошадей, [14] птиц [15] и макак. [16] Хотя уже более десяти лет было известно, что вирусы гриппа с частичными делециями в белках NS1 ослаблены, все, кроме одного [17], варианты усечения NS1 вирусов гриппа А были получены путем мутагенеза in vitro. Позже Ван и др. продемонстрировали, что естественно усеченный вариант [17] имел склонность к образованию новых вариантов при пассировании in ovo. [18] Примечательно, что новые варианты оказались превосходными кандидатами на роль живых ослабленных вакцин против гриппа. [18] Возможность ослаблять вирусы гриппа путем усечения белка NS1 представляет собой новый подход к проектированию и разработке следующего поколения живых ослабленных вакцин против гриппа как для птиц, так и для людей.