пятно Лейшмана

Окраска Лейшмана , также известная как окраска Лейшмана , используется в микроскопии для окрашивания мазков крови . Обычно ее используют для дифференциации и идентификации лейкоцитов , малярийных паразитов и трипаносом . Она основана на метанольной смеси «полихромного» метиленового синего (т. е. деметилированного в различные лазури) и эозина . Основной метанольный раствор стабилен и также служит для прямой фиксации мазка, исключая этап предварительной фиксации. Если рабочий раствор готовится путем разбавления водным буфером, полученная смесь очень нестабильна и не может использоваться долгое время. Окраска Лейшмана названа в честь ее изобретателя, шотландского патолога Уильяма Буга Лейшмана . Это версия окраски Романовского , и, таким образом, она похожа на окраску Гимзы , окраску Дженнера и окраску Райта и частично заменяет их .

Многие компании продают краситель Лейшмана в виде сухого порошка, который затем восстанавливается метанолом . ^[1] Тепло и яркий свет окисляют краситель и вызывают выпадение нерастворимых осадков, таких как метиленовый фиолетовый (Бернсен) или соли азур-эозината. ^[2]

Этот раздел написан как личное размышление, личное эссе или аргументативное эссе , в котором излагаются личные чувства редактора Википедии или излагается оригинальный аргумент по теме. Пожалуйста, помогите улучшить его, переписав в энциклопедическом стиле . ( Январь 2019 ) ( Узнайте, как и когда удалять это сообщение )

Согласно учебнику сэра Джона Вивиана Дейси « Практическая гематология» , «среди используемых в настоящее время окрасок по Романовскому, окраски Дженнера являются наиболее простыми, а окраски Гимзы — наиболее сложными. Окраска Лейшмана, занимающая промежуточное положение, по-прежнему широко используется в рутинной окраске».

В протоколе ВОЗ ^[3] упоминается:

Существует ряд различных комбинаций этих красителей, которые различаются по своим характеристикам окрашивания. Окраска по Май-Грюнвальду-Гимзе является хорошим методом для рутинной работы. Окраска по Райту является более простым методом, в то время как окраска по Лейшману также является простым методом, который особенно подходит, когда окрашенный мазок крови требуется срочно или рутинная окраска недоступна (например, ночью). Окраска по Филду является быстрым методом окрашивания, используемым в основном для тонких мазков на наличие малярийных паразитов. Какой бы метод ни использовался, важно выбирать красители, не загрязненные другими красителями или солями металлов.

Сэр Уильям Буг Лейшман из Лондона и Карл Рейтер из Германии независимо друг от друга открыли в 1901 году то, что считается «возможно, наиболее практичной модификацией окраски Малаховского» ^[4]. Они переняли лучшие аспекты окрасок, разработанных Малаховским и Дженнером, то есть, они использовали как полихромный метиленовый синий (случайно сделанный Романовским, который получил это название, систематически сделанный Эрнстом Малаховским еще до Романовского, и заново открытый Бернхардом Нохтом, но неизвестный Дженнеру, Мэю, Грюнвальду и многим другим, которые использовали простой метиленовый синий), так и фильтрацию осадка лазурного эозината из водной смеси и повторное растворение в спиртовом растворителе (мудрость Дженнера). Различия между методами Лейшмана и Рейтера были следующими: Лейшман использовал метанол (как Дженнер) и заменил эозин B на эозин Y, тогда как Рейтер использовал этиловый спирт и справедливо подчеркивал важность использования абсолютно чистого растворителя. Оба метода дали стабильное окрашивание и желаемый фиолетовый цвет.

Окраска Лейшмана обычно показывает яркий фиолетовый цвет ядра и гранул нейтрофилов, для которых дифференциальный подсчет становится удобным и делает качество окрашивания лучше, чем окрашивания на основе простого метиленового синего и эозина, которые не дают достаточного контраста между цитоплазмой и ядром. Поскольку Лейшман, как и другие окраски Романовского, лучше окрашивают цитоплазматические детали и гранулы, гематологи обычно предпочитают их (однако см. ниже о цитологах). По сравнению с дорогостоящими и токсичными чистыми синтетическими реагентами на основе AZure B и эозина Y, используемыми в референтных методах ICSH, которые также не свободны от недостатка окисления и в конечном итоге дают серый тон вместо оптимальных синих цветов для цитоплазмы, Лейшман является дешевой, легкодоступной и простой в использовании техникой, которая дает довольно приемлемый контраст. ^{[ необходима цитата ]}

Было документально подтверждено, что окрашивание по Лейшману более чувствительно, чем окрашивание по Филду, и так же хорошо, как флуоресцентные красители, для обнаружения малярийного паразита. ^[5]

Состав полихромного метиленового синего, смешанного с эозином, никогда не бывает таким же хорошим, как прямо взвешенные и смешанные пропорции в красителях типа Гимзы. Альберт Плен в 1890 году ^[6] выяснил, что молярное соотношение основных и кислотных красителей должно быть увеличено с 2:1 до 3:1, однако со времен Дженнера (1899) использование кристаллов эозината лазури вернуло соотношение к неудовлетворительным 2:1, и глубина цвета стала меньше. Только работа Густава Гимзы и ему подобных, которые снова вручную контролировали пропорцию этих двух компонентов, вернула глубину окрашивания. Однако Гимза и другие, которые искусственно контролировали пропорцию, иногда доходили до другой крайности (большой молярный избыток лазури до соотношения 16,1), что, вероятно, было излишним. Согласно ICSH, оптимальное соотношение составляет 6,5 к 7,3. ^[7]

Окраска Лейшмана, если ее восстановить буфером, становится очень нестабильной (в отличие от окраски Гимзы, которая относительно более стабильна из-за глицерина, или эталонных окрасок ICSH, которые используют метанол+ДМСО в соотношении 6:4 по объему) и начинает осаждаться, и требуется повторная фильтрация. Если тщательно не контролировать, поглощение воды, испарение метанола из открытого контейнера и повторная фильтрация изменяют состав и требуют частой замены, что делает этот метод расточительным. Если ее не фильтровать, осадок на мазке можно спутать с тромбоцитами. Важно не встряхивать флакон с краской перед использованием, иначе осевшие осадки будут ресуспендированы и будут осаждаться на пленках во время окрашивания, что приведет к многочисленным артефактам и сильно затруднит микроскопию. ^{[ необходима цитата ]}

Как и все другие методы Малаховского-Романовского-Гимзы, он со временем тускнеет и не может быть стабильно архивирован в течение длительного времени. Также его аналоги выше окрашивают ядра в темно-фиолетовый цвет, и детали ядерных особенностей не такие четкие, как гематоксилен и эозин , которые поэтому предпочитают некоторые цитопатологи. Но таким образом это дополнительный метод (так как он окрашивает цитоплазматические детали гранулы и т. д. лучше, чем окраска H&E ). ^{[ необходима цитата ]}