Клетки КБМ-7

Клетки KBM-7 — это клеточная линия хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ), используемая для биомедицинских исследований. Как и все линии раковых клеток , она бессмертна и может делиться бесконечно. Уникальным аспектом клеточной линии KBM-7 является то, что она почти гаплоидна , то есть содержит только одну копию для большинства своих хромосом. ^[1] Человеческие хромосомы, как правило, диплоидны, то есть существуют две копии каждой хромосомы.

Источник

Клетки KBM-7 были получены от 39-летнего мужчины с хроническим миелоидным лейкозом в состоянии бластного криза. ^[1] Исходная клеточная линия содержала как почти гаплоидные , так и гипердиплоидные клоны. Последующее субклонирование дало чистую почти гаплоидную клеточную линию. ^[2] Анализ генома показал, что помимо дисомной хромосомы 8, 30-мегабазовый фрагмент хромосомы 15 присутствует в двух копиях. ^[3] Как и другие линии клеток CML (например, K562 ), клетки KBM-7 положительны для хромосомы Филадельфия, содержащей онкогенное слияние BCR-ABL. Клетки KBM-7 были перепрограммированы для получения клеточной линии HAP1 , которая также является моносомной для хромосомы 8. ^[4]

Выращивание и применение

Клетки KBM-7 растут в суспензии и поддерживаются в модифицированной среде Дульбекко по Искову (IMDM), дополненной 10% сыворотки плода быка . Они делятся примерно каждые 24 часа. ^{[ необходима цитата ]}

KBM-7 нашел применение в различных геномных исследованиях; клеточная линия была изучена в экспериментах по подавлению генов , была перепрограммирована в линию стволовых клеток и служила в качестве испытательной модели для новых кандидатов на лекарственные препараты. ^[5]

Значение

Один из методов изучения функции гена включает «выключение» гена путем индукции мутации. Это приводит к тому, что полученный продукт гена становится нефункциональным, и исследователи затем могут увидеть, как это влияет на функцию клетки в целом. Многие процедуры редактирования генов имеют очень низкую эффективность, и часто обе копии хромосом млекопитающих должны быть выключены, чтобы увидеть фенотипический эффект. Наличие почти гаплоидной клеточной линии, такой как KBM-7, значительно повышает эффективность этих исследований, поскольку есть только один ген, который должен быть выключен. ^[6]

Ссылки

^ ab Andersson, BS, Beran, M., Pathak, S., Goodacre, A., Barlogie, B. и McCredie, KB (1987). "Ph-положительный хронический миелоидный лейкоз с почти гаплоидной конверсией in vivo и установление непрерывно растущей линии клеток со схожим цитогенетическим паттерном". Cancer Genet. Cytogenet . 24 (2): 335– 343. doi :10.1016/0165-4608(87)90116-6. PMID 3466682.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Kotecki M, Reddy PS, Cochran BH (1999). «Выделение и характеристика почти гаплоидной линии клеток человека». Exp. Cell Res . 252 (2): 273– 80. CiteSeerX 10.1.1.24.783 . doi :10.1006/excr.1999.4656. PMID 10527618.
^ Бюркштюммер Т, Баннинг С, Хайнцль П, Шобсбергер Р, Керцендорфер С, Паулер ФМ, Чен Д, Они Н, Шишлик Ф, Ребсамен М, Смида М, Фесе де ла Крус Ф, Лапао А, Лист М, Эйзингер Б, Генцль П.М., Бломен В.А., Конопка Т., Гапп Б., Парапатикс К., Майер Б., Штёкль Дж., Фишль В., Салич С., Таба Казари М.Р., Кнапп С., Беннетт К.Л., Бок С., Колинг Дж., Краловикс Р., Аммерер Г., Казари Г., Бруммелькамп Т.Р., Суперти-Фурга Г., Найман С.М. (2013). «Коллекция обратимых генных ловушек усиливает гаплоидную генетику в клетках человека». Нат-методы . 10 (10): 965– 71. doi : 10.1038/nmeth.2609. PMC 6342250. PMID 24161985 .
^ Carette JE, Raaben M, Wong AC, Herbert AS, Obernosterer G, Mulherkar N, Kuehne AI, Kranzusch PJ, Griffin AM, Ruthel G, Dal Cin P, Dye JM, Whelan SP, Chandran K, Brummelkamp TR (2011). «Для проникновения вируса Эбола требуется транспортер холестерина Ниманна-Пика C1». Nature . 477 (7364): 340– 3. Bibcode :2011Natur.477..340C. doi :10.1038/nature10348. PMC 3175325 . PMID 21866103.
^ Эсслетцбихлер, Патрик и др. (декабрь 2014 г.). «Удаление в масштабе мегабазы с использованием CRISPR/Cas9 для создания полностью гаплоидной линии клеток человека». Genome Research . 24 (12): 2059– 206. doi :10.1101/gr.177220.114. PMC 4248322 . PMID 25373145.
^ Дункан, Лидия М.; Тиммс, Ричард Т.; Заводски, Эстер; Кано, Флоренсия; Дуган, Гордон; Рэндоу, Феликс; Ленер, Пол Дж. (2012-06-22). "Фенотипический отбор на основе флуоресценции позволяет проводить прямые генетические скрининги в гаплоидных клетках человека". PLOS ONE . 7 (6): e39651. Bibcode :2012PLoSO...739651D. doi : 10.1371/journal.pone.0039651 . ISSN 1932-6203. PMC 3382162 . PMID 22745803.

Внешние ссылки

Целлозавр запись для КБМ-7

[andersson-1] Andersson, BS, Beran, M., Pathak, S., Goodacre, A., Barlogie, B. и McCredie, KB (1987). "Ph-положительный хронический миелоидный лейкоз с почти гаплоидной конверсией in vivo и установление непрерывно растущей линии клеток со схожим цитогенетическим паттерном". Cancer Genet. Cytogenet . 24 (2): 335– 343. doi :10.1016/0165-4608(87)90116-6. PMID 3466682.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[2] Kotecki M, Reddy PS, Cochran BH (1999). «Выделение и характеристика почти гаплоидной линии клеток человека». Exp. Cell Res . 252 (2): 273– 80. CiteSeerX 10.1.1.24.783 . doi :10.1006/excr.1999.4656. PMID 10527618.

[3] Бюркштюммер Т, Баннинг С, Хайнцль П, Шобсбергер Р, Керцендорфер С, Паулер ФМ, Чен Д, Они Н, Шишлик Ф, Ребсамен М, Смида М, Фесе де ла Крус Ф, Лапао А, Лист М, Эйзингер Б, Генцль П.М., Бломен В.А., Конопка Т., Гапп Б., Парапатикс К., Майер Б., Штёкль Дж., Фишль В., Салич С., Таба Казари М.Р., Кнапп С., Беннетт К.Л., Бок С., Колинг Дж., Краловикс Р., Аммерер Г., Казари Г., Бруммелькамп Т.Р., Суперти-Фурга Г., Найман С.М. (2013). «Коллекция обратимых генных ловушек усиливает гаплоидную генетику в клетках человека». Нат-методы . 10 (10): 965– 71. doi : 10.1038/nmeth.2609. PMC 6342250. PMID 24161985 .

[4] Carette JE, Raaben M, Wong AC, Herbert AS, Obernosterer G, Mulherkar N, Kuehne AI, Kranzusch PJ, Griffin AM, Ruthel G, Dal Cin P, Dye JM, Whelan SP, Chandran K, Brummelkamp TR (2011). «Для проникновения вируса Эбола требуется транспортер холестерина Ниманна-Пика C1». Nature . 477 (7364): 340– 3. Bibcode :2011Natur.477..340C. doi :10.1038/nature10348. PMC 3175325 . PMID 21866103.

[5] Эсслетцбихлер, Патрик и др. (декабрь 2014 г.). «Удаление в масштабе мегабазы с использованием CRISPR/Cas9 для создания полностью гаплоидной линии клеток человека». Genome Research . 24 (12): 2059– 206. doi :10.1101/gr.177220.114. PMC 4248322 . PMID 25373145.

[6] Дункан, Лидия М.; Тиммс, Ричард Т.; Заводски, Эстер; Кано, Флоренсия; Дуган, Гордон; Рэндоу, Феликс; Ленер, Пол Дж. (2012-06-22). "Фенотипический отбор на основе флуоресценции позволяет проводить прямые генетические скрининги в гаплоидных клетках человека". PLOS ONE . 7 (6): e39651. Bibcode :2012PLoSO...739651D. doi : 10.1371/journal.pone.0039651 . ISSN 1932-6203. PMC 3382162 . PMID 22745803.