Элюция антител

Элюция антител — это клиническая лабораторная диагностическая процедура, которая удаляет сенсибилизированные антитела из эритроцитов , чтобы определить антиген системы группы крови, на который нацелены антитела. ^[1] Элюция антител считается необходимой, когда антитела класса иммуноглобулинов G (IgG) обнаруживаются сенсибилизированными (связанными) с периферическими эритроцитами, полученными от реципиента переливания крови. ^[2] Антитела IgG обнаруживаются с помощью анализа, известного как прямой антиглобулиновый тест . ^[3]

Элюирование антител — это специализированные тесты, используемые в клинических банках крови . Примерами рутинных тестов являются ABO/Rh , скрининг антител, идентификация антител и тестирование на антиглобулин . Примерами других специализированных тестов, используемых в банках крови, являются: обработка тиоловым реагентом, анализ монослоя моноцитов , обработка ферментами и адсорбция. ^[2]

Эта процедура помогает в исследовании антител, которые трудно идентифицировать, различении реакций на переливание крови , гемолитической болезни плода и новорожденного , а также в исследовании аутоантител к теплу. ^[4]

Мембраны эритроцитов состоят из фосфолипидного бислоя, заполненного белками , липидами , углеводами и комбинациями этих веществ. ^[5] Эти вещества называются антигенами , потому что они стимулируют иммунный ответ , когда человек подвергается воздействию вещества, но у человека, подвергшегося воздействию, не наблюдаются и не экспрессируются гены, кодирующие указанные антигены. ^[6] У каждого человека есть уникальный генетический и фенотипический состав антигенов, во многом похожий на дерматоглифику отпечатков пальцев человека .

По состоянию на 2023 год существует 44 системы групп крови, каждая из которых содержит несколько антигенов эритроцитов, в общей сложности 354, определяемых приблизительно 49 отдельными генами. ^[7] Из этих антигенов только несколько считаются клинически значимыми, что означает, что они могут стимулировать выработку антител, способных вызывать гемолиз эритроцитов. Это особенно важно для переливания эритроцитарной массы и других клеточных продуктов крови. Примеры систем групп крови, которые содержат антигены, способные вызывать клинически значимые аллоантитела (антитела против чужеродных антигенов), включают, помимо прочего, системы групп крови ABO , Rh , Kell , Duffy , Kidd и MNS . ^[8]

Антитела к антигенам системы групп крови и их характеристики должны быть идентифицированы, когда такие антитела обнаружены в сыворотке или плазме потенциального реципиента . ^[9] Специфичность антитела помогает медицинскому лабораторному исследователю определить, является ли антитело клинически значимым. Идентификация антител является очень трудоемким процессом. ^[1]

Характеристики клинически значимых антител включают: реактивность при температуре тела (37 °C), иммуноглобулин (Ig) класса G , IgM , который реагирует при температуре тела, способность проникать через плаценту , способность вызывать разрушение эритроцитов и/или антитела, направленные против общеизвестных клинически значимых антигенов эритроцитов. ^[10] Например, если человек подвергается воздействию антигена эритроцитов (через переливание крови, беременность, трансплантацию стволовых клеток), которым он изначально не обладает, он может сформировать клинически значимое антитело, направленное против этого антигена. Если пациенту переливают эритроцитарную массу, обладающую антигеном Kell (большой K или просто K), он может сформировать антитело, называемое анти-K (анти-большой K). Последующие переливания с K-положительной эритроцитарной массой вызовут немедленную гемолитическую трансфузионную реакцию . Антитело K реагирует при 37 °C, является IgG, способно проникать через плаценту и, как известно, вызывает немедленное разрушение эритроцитов.

Наличие аутоантител, направленных против собственных антигенов эритроцитов, может усложнить процесс идентификации антител. Аутоантитела эритроцитов, как правило, специфичны для антигенов эритроцитов, часто встречающихся в популяции. Элюция антител может помочь в идентификации клинически значимых аллоантител , когда аутоантитела мешают процессу идентификации антител. ^[11]

Существует несколько методов элюирования антител, используемых в клиническом банке крови. Некоторые из этих методов включают манипулирование температурой, манипулирование pH , использование органических растворителей и хлорохина . ^[2] Каждый из этих методов имеет свои преимущества и недостатки, а метод элюирования будет различаться в зависимости от клинической полезности. Одним из наиболее часто используемых методов является кислотное элюирование, поскольку оно быстрое, дешевое и относительно простое в исполнении. ^{[3] [12]}

Основные этапы кислотного элюирования включают: ^{[3] [2]}

1. Отделите и тщательно промойте эритроциты из периферически собранной пробирки с ЭДТА с помощью центрифугирования .
2. Смешайте промытые эритроциты пациента, дающие положительный результат на фазу IgG прямого антиглобулинового теста , с глициновой кислотой (рН 3,0).
3. Центрифугируйте смесь и немедленно удалите надосадочную жидкость из разрушенных эритроцитов.
4. Добавьте буфер, чтобы вернуть смесь к нейтральному pH. Этот шаг имеет решающее значение для дальнейшего тестирования идентификации антител, поскольку антитело не будет реагировать при pH ниже 7,0.
5. Для осветления раствора может потребоваться дополнительное центрифугирование.
6. Полученный раствор называется элюатом. Затем этот элюат тестируется на панели эритроцитов с известными профилями антигенов. Эта процедура идентификации антител поможет определить специфичность антитела.

Основным методом обнаружения антител и антигенов, используемым в клинической лаборатории, является агглютинация эритроцитов . ^[1] Большинство антител IgM легче обнаружить, поскольку они крупнее и реагируют при комнатной температуре (20 °C). ^{[13] [14]} Эта концепция делает тестирование ABO/Rh таким быстрым и простым в выполнении. Однако большинство клинически значимых антител, не относящихся к ABO, реагируют при температуре тела (37 °C) и не приведут к агглютинации без добавления нескольких этапов: инкубации, промывки и добавления реагента античеловеческого глобулина (AHG). ^[15]

Античеловеческий глобулин — это антитело, направленное против человеческих антител IgG. ^[16] Когда меньшее антитело IgG прикрепляется к эритроцитам, большие антитела AHG создают перекрестную связь между сенсибилизированными IgG эритроцитами, формируя визуальную агглютинацию. Когда наблюдается эта агглютинация, тест на антиглобулин считается положительным для обнаружения присутствующих антител и/или антигенов. ^[2]

Существует два основных типа антиглобулинового теста: непрямой и прямой. ^{[17] [18]} Непрямой антиглобулиновый тест используется для обнаружения антител в плазме / сыворотке , тогда как прямой антиглобулиновый тест используется для обнаружения антител, связанных с эритроцитами. Если прямой антиглобулиновый тест положительный, мы должны выполнить элюцию антител, чтобы удалить антитело для идентификации и определить клиническую значимость антитела. ^[3]

• Острая гемолитическая трансфузионная реакция
• Аллоантитела
• Аутоантитела
• Элюция